为了研究低温诱导对某基因的启动子P活性的影响，科研人员进行了启动子P的PCR提取、特定表达载体的构建和转基因烟草的功能鉴定。该基因及其启动子P的结构及相应限制酶的切割位点如图1所示，图中灰色区域碱基序列是已知的，启动子P（图中黑色区域）及上游碱基序列未知，片段Ⅰ和片段Ⅱ中的字母A～F均表示引物。请回答下列问题。
（1）启动子是 RNA聚合酶识别并结合RNA聚合酶识别并结合的位点。不能直接根据片段I扩增启动子P的原因是 启动子P及左侧的序列未知，无法合成PCR所需要的引物启动子P及左侧的序列未知，无法合成PCR所需要的引物。
（2）为了能扩增正常启动子P，科研人员先用 酶1和DNA连接酶1和DNA连接酶处理图中的片段Ⅰ，使片段Ⅰ成为环状DNA；再将环状DNA用 酶2酶2（填“酶1”或“酶2”）处理得到了片段Ⅱ，如图2所示。根据片段Ⅱ能不能扩增出启动子P？若能，请写出可选用的引物组合（用C、D、E、F表示），若不能请说明理由 能，可选用的引物组合是D和E能，可选用的引物组合是D和E。
（3）已知卡那霉素可抑制烟草细胞的生长，基因M可在烟草的根部正常表达，其表达产物可将X-Gluc水解生成蓝色物质。将启动子P和基因M结合并与含有卡那霉素抗性基因的Ti-质粒重组构建基因表达载体。将表达载体和酚类物质混合后加入含有烟草细胞的培养基中，酚类物质的作用是 吸引农杆菌感染烟草细胞吸引农杆菌感染烟草细胞。再用含有 卡那霉素和X−Gluc卡那霉素和X−Gluc的培养基筛选出所需的烟草细胞，然后经过植物组织培养获得转基因烟草植株。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】RNA聚合酶识别并结合；启动子P及左侧的序列未知，无法合成PCR所需要的引物；酶1和DNA连接；酶2；能，可选用的引物组合是D和E；吸引农杆菌感染烟草细胞；卡那霉素和X−Gluc
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：16引用：1难度：0.5
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发布：2025/1/5 8:0:1组卷：6引用：1难度：0.7 -
2．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6 -
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