凝乳酶是食品生产中常用的凝结剂，科研人员从动物体内获得了凝乳酶mRNA，拟利用大肠杆菌通过基因工程生产凝乳酶。据此回答下列问题：
（1）利用凝乳酶mRNA，在 逆转录逆转录酶的作用下，可以得到凝乳酶的cDNA，进一步通过PCR扩增时需要2种引物，引物的作用是 与模板单链结合延伸子链（使DNA聚合酶从引物的3’端开始 连接脱氧核苷酸）与模板单链结合延伸子链（使DNA聚合酶从引物的3’端开始 连接脱氧核苷酸）。
（2）图1和图2是选用的质粒及其几种相关限制酶的识别位点，在构建基因表达载体时，最好选用的限制酶是 EcoRⅠ、BglⅡ或EcoRⅠ、BamHⅠEcoRⅠ、BglⅡ或EcoRⅠ、BamHⅠ，这样选择的优点是 避免标记基因被破坏、质粒自身环化和目的基因的反向连接（确保目的基因与质粒正向连接）避免标记基因被破坏、质粒自身环化和目的基因的反向连接（确保目的基因与质粒正向连接）（答出两点）。为在凝乳酶基因两侧加上相应的酶切位点，设计引物时需在引物前添加相应酶切位点，PCR过程中至少复制 33次可以得到含所需酶切位点的凝乳酶基因。
（3）将构建的重组质粒导入大肠杆菌，需要用钙离子处理，使大肠杆菌处于 感受态（容易吸收外源DNA分子的状态）感受态（容易吸收外源DNA分子的状态）。
（4）将在添加了青霉素的培养基中得到的4个大肠杆菌菌落，进行进一步检测，检测结果如图3所示，1～4号菌落需要舍弃的是1号和 2号、3号2号、3号。其中舍弃1号菌落的理由是 目的基因未导入目的基因未导入。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】逆转录；与模板单链结合延伸子链（使DNA聚合酶从引物的3’端开始 连接脱氧核苷酸）；EcoRⅠ、BglⅡ或EcoRⅠ、BamHⅠ；避免标记基因被破坏、质粒自身环化和目的基因的反向连接（确保目的基因与质粒正向连接）；3；感受态（容易吸收外源DNA分子的状态）；2号、3号；目的基因未导入
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：33引用：2难度：0.9
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（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6
