现代生物技术。
脱氧核苷酸链是有方向的，一端为5'端，另一端为3'端，DNA分子两条脱氧核苷酸链反向平行。DNA复制时，称为引物的小段核苷酸链先与模板链配对结合，然后在引物的3'端进行子链延伸，在引物的5'端不能进行子链延伸（如图1）。

（1）在图1的数字编号①～③中，代表解旋过程的是

①

①

，此过程中发生断裂的键是

氢键

氢键

。
聚合酶链反应（PCR）可自动化重复进行图1所示的①～③步骤，每完成一次①～③步骤称为完成一个循环，每个循环各步骤的反应条件设计为：步骤①在94℃持续30秒，步骤②在55℃持续30秒，步骤③在72℃持续1分钟。某研究小组拟用PCR技术和引物1、2从图2所示DNA分子中扩增出编码蛋白质H的基因，并开展后续研究。

（2）下列关于PCR的叙述中，正确的是

C

C

。
A．PCR是检测生物遗传多样性最可靠的方法
B．可从人体细胞提取DNA聚合酶用于PCR反应
C．通过PCR扩增目的基因属于化学方法人工合成
D．若引物能与模板DNA多个位置结合，则可提高PCR扩增效率
（3）通过上述PCR反应获得目的基因片段后，拟将其插入质粒pZHY1中构建重组DNA分子pZHY2．已知在pZHY1上存在EcoRⅠ、BamHⅠ、KpnⅠ、XbaⅠ4种限制酶的识别序列（如表），则应选用的限制酶组合是

B

B

。

EcoRⅠ	BamHⅠ	KpnⅠ	XbaⅠ
G↓AATTC CTTAA↑G	G↓GATCC CCTAG↑G	GGTAC↓C C↑CATGG	T↓CTAGA AGATC↑T

A．BamHⅠ和EcoRⅠ
B．BamHⅠ和KpnⅠ
C．EcoRⅠ和KpnⅠ
D．EcoRⅠ和XbaⅠ
（4）将重组DNA分子pZHY2导入大肠杆菌后，就可通过大规模培养大肠杆菌制备蛋白质H．若要获得纯化的蛋白质H，下列操作步骤中Ⅰ代表

①②

①②

，Ⅱ代表

④

④

。
破碎细胞→过滤一Ⅰ→Ⅱ→通过冷冻干燥结晶蛋白质
①改变pH沉淀蛋白质
②加入硫酸铵沉淀蛋白质
③将蛋白质进行固定化
④通过层析提纯蛋白质
（5）若要制备抗蛋白质H的单克隆抗体，相关说法中正确的有

ACD

ACD

。（多选）
A．可以用上述步骤所得纯化的蛋白质H作为抗原免疫动物
B．从动物的脾脏收集B淋巴细胞，并使之与杂交瘤细胞融合
C．单克隆抗体是由单个杂交瘤细胞增殖产生的杂交瘤细胞群分泌的成分单一的抗体
D．从PCR扩增目的基因到制备单克隆抗体，共涉及基因工程、发酵工程、细胞工程