大肠杆菌β-半乳糖苷酶（Z酶）可催化底物（X-gal）水解产生蓝色物质。在pUC18质粒中，lacZ′编码Z酶氨基端的一个片段（称为α-肽），该质粒结构及限制酶识别位点如图甲所示。已知α-肽、缺失α-肽的Z酶片段单独存在时均无Z酶活性，共同存在时就会表现出Z酶活性。利用图乙中的DNA片段与pUC18质粒进行基因工程操作。
（1）限制酶能催化双链DNA分子中磷酸二酯键磷酸二酯键（填化学键名称）的断裂。本实验可使用限制酶Sal ISal I处理pUC18质粒和图乙中的DNA片段，再通过DNA连接酶连接，获得含目的基因的重组质粒。
（2）用重组质粒转化大肠杆菌，然后将大肠杆菌接种到含氨苄青霉素的固体培养基上进行培养，由于未发生转化的大肠杆菌没有该质粒，因而不具有氨苄青霉素抗性氨苄青霉素抗性，在该培养基上不能生长。从功能上划分，该培养基属于选择选择培养基。
（3）当上述培养基中含有X-gal时，生长出的菌落有蓝色和白色两种类型，其中含有重组质粒的大肠杆菌的菌落颜色为白色白色，这是因为目的基因与质粒连接后使lacZ′被破坏，不能合成α-肽目的基因与质粒连接后使lacZ′被破坏，不能合成α-肽。为保证能通过菌落颜色辨别出含有重组质粒的大肠杆菌，本实验作为受体细胞的大肠杆菌中Z酶基因应满足的条件是编码α-肽的DNA序列缺失，其他序列正常编码α-肽的DNA序列缺失，其他序列正常。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】磷酸二酯键；Sal I；氨苄青霉素抗性；选择；白色；目的基因与质粒连接后使lacZ′被破坏，不能合成α-肽；编码α-肽的DNA序列缺失，其他序列正常
【解答】
【点评】
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发布：2024/4/20 14:35:0组卷：45引用：3难度：0.7
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