定点突变技术是指通过PCR等方法改变DNA片段特定位点的碱基，从而获得突变基因的操作技术。研究者将酿酒酵母S288c的APAⅠ基因与EGFP（增强型绿色荧光蛋白）基因构成融合基因，并进一步构建表达载体，以该载体为模板，再通过PCR介导的定点突变技术向APAⅠ基因中分别引入APAⅠ-1/2/3/4四个突变位点，分别转化酿酒酵母YS59。回答下列问题：
（1）构建APAⅠ基因与EGFP基因的融合基因时.需借助的工具酶是 限制酶、DNA连接酶限制酶、DNA连接酶，使APAⅠ基因与EGFP基因首尾相连，处在同一 启动子启动子、终止子终止子等调控序列的控制之下；EGFP基因的作用是 作为标记基因作为标记基因。
（2）上述PCR介导的定点诱变过程中，除以载体为模板外，还需要加入四种 脱氧核苷酸脱氧核苷酸，两种根据 APA1基因APA1基因的序列设计合成且含有突变位点的互补的引物。
（3）若在荧光显微镜下观察到受体细胞有绿色荧光，表明 APA1基因与EGFP基因已经表达（形成蛋白质产物）APA1基因与EGFP基因已经表达（形成蛋白质产物）。
（4）若将定点突变的基因导入植物细胞，在一定 营养和激素营养和激素（答出2点）等条件下，转基因细胞经过脱分化形成 愈伤组织愈伤组织，进一步诱导其 再分化再分化可以发育成转基因植株。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】限制酶、DNA连接酶；启动子；终止子；作为标记基因；脱氧核苷酸；APA1基因；APA1基因与EGFP基因已经表达（形成蛋白质产物）；营养和激素；愈伤组织；再分化
【解答】
【点评】
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发布：2024/4/20 14:35:0组卷：12引用：3难度：0.7
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2．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6 -
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