大肠杆菌因其结构、代谢和生殖等特点常应用于发酵工程，特定的重组大肠杆菌生产乳酸效率比乳酸菌更高，杂菌污染是导致大肠杆菌大规模发酵失败的重要原因。研究人员利用基因工程获得了相关的工程菌用于大规模生产乳酸。回答下列问题。

（1）大肠杆菌除了需要图中葡萄糖为其提供碳源外，还需要的营养成分有

氮源、水、无机盐

氮源、水、无机盐

。
（2）科学家利用重组片段和特定技术敲除原始菌株拟核上的F酶基因，获得更高效的乳酸发酵工程菌，过程如图乙。重组片段上的庆大霉素抗性基因（Gm^r）除了能替换掉拟核上的F酶基因外，还起到的

作为标记基因，用于筛选出 F 基因敲除的突变菌株

作为标记基因，用于筛选出 F 基因敲除的突变菌株

作用。综合图甲和图乙信息，若要进一步提高产物产量，还需要敲除的基因是

T 酶基因

T 酶基因

。
（3）研究人员利用基因工程技术，使甲酰胺酶基因和亚磷酸脱氢酶基因在大肠杆菌中同时表达，改造出一种加强型大肠杆菌，可以通过控制培养基中的氮源和磷源种类实现高效抑制杂菌污染的目的。研究人员设计引物时，不能包含目的基因的终止密码子的编码序列，原因是

若设计引物中含有目的基因的终止密码子，则核糖体读到终止密码子时就停止翻译，导致目的基因不能正常表达

若设计引物中含有目的基因的终止密码子，则核糖体读到终止密码子时就停止翻译，导致目的基因不能正常表达

。引物序列的长度及

G-C 碱基对比例

G-C 碱基对比例

直接影响着PCR过程中复性温度的设定。通过PCR分别特异性扩增出甲酰胺酶基因和亚磷酸脱氢酶基因，PCR过程中的引物需要

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种。