透明质酸酶临床常用作药物渗透剂，目前市场上出售的透明质酸酶主要从动物组织中提取，成本高且提纯困难．科研人员尝试将透明质酸酶基因（Hyl）高效表达；重叠延伸PCR是一种定点突变技术，主要设计思路是用具有互补配对片段的引物，进行PCR1和PCR2获得部分重叠的两种 DNA片段，再在随后的扩增反应中通过重叠部分的互补和延伸获得目的基因．其过程如图所示，Nco I和XhoI为限制酶识别位点．请分析回答下列有关问题：
（1）步骤②中所用到的工具酶有限制酶和DNA连接酶限制酶和DNA连接酶，NcoⅠ切割磷酸二酯磷酸二酯键．
（2）步骤①进行定点突变的目的是防止限制酶（NcoI）破坏目的基因防止限制酶（NcoI）破坏目的基因，将透明质酸酶基因转入大肠杆菌使其高效表达，利用了大肠杆菌的繁殖快，单细胞，遗传物质相对较少繁殖快，单细胞，遗传物质相对较少特点，导入大肠杆菌时，首先要用Ca2+Ca2+处理．
（3）在利用重叠延伸PCR进行定点突变时需要如图所示四种引物，若PCR1所用引物为引物1和引物3，则PCR2时B 点所选用的引物是图中的引物4引物4，如果突变后的透明质酸酶基因进行PCR，所选的引物为引物1和引物2引物1和引物2．
（4）谷丙转氨酶和天冬氨酸转氨酶是长期用于病毒性肝炎患者肝功能的检测指标．最近，研究者提出检测空腹血清透明质酸酶水平了解肝硬化患者的肝损害程度，请分析其机理．正常情况下，透明质酸酶在细胞中存在，血清透明质酸酶高，说明肝细胞坏死增多正常情况下，透明质酸酶在细胞中存在，血清透明质酸酶高，说明肝细胞坏死增多．
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】限制酶和DNA连接酶；磷酸二酯；防止限制酶（NcoI）破坏目的基因；繁殖快，单细胞，遗传物质相对较少；Ca2+；引物4；引物1和引物2；正常情况下，透明质酸酶在细胞中存在，血清透明质酸酶高，说明肝细胞坏死增多
【解答】
【点评】
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发布：2024/4/20 14:35:0组卷：17引用：2难度：0.3
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（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6
