干扰素是一种重要的免疫活性物质，具有抗病毒、调节免疫等功效。如图是研究人员利用基因工程生产人干扰素的三种方法。请回答下列问题：

第一种方法是利用基因工程通过培育山羊乳腺生物反应器大量生产干扰素。
（1）基因工程获取的人干扰素基因一般来自cDNA文库，获取的目的基因可通过

PCR技术

PCR技术

大量扩增，扩增需要的条件有模板DNA、dNTP、引物、

耐高温的DNA聚合酶

耐高温的DNA聚合酶

、高温等。
（2）重组人干扰素基因表达载体由山羊酪蛋白基因启动子，人干扰素基因，标记基因和终止等组成，其中

山羊酪蛋白基因启动子

山羊酪蛋白基因启动子

决定了人干扰素基因只能在山羊乳腺细胞中特异性表达。一般需要将重组人干扰素基因表达载体导入

雌性

雌性

（填“雄性”或“雌性”）胚胎细胞中。在转基因羊发育成熟时，为了检测羊奶中是否有人干扰素，可用

抗原—抗体杂交技术

抗原—抗体杂交技术

方法。
第二种方法是利用蛋白质工程来合成干扰素。
（3）如果我们采用蛋白质工程来合成人干扰素，可以通过

改造或合成基因

改造或合成基因

，对现有蛋白质进行改造，或制造新的蛋白质，以满足人类生产和生活的需要。
第三种方法是利用基因工程通过大肠杆菌来生产干扰素。
（4）具体做法是将产生干扰素的人白细胞的mRNA分离，反转录得到干扰素基因。将含有四环素、氨苄青霉素抗性基因的质粒PBR322和干扰素基因进行双酶切，用DNA连接酶连接。将重组载体DNA分子在一定条件下导入大肠杆菌，在培养基中筛选培养，检测干扰素的表达量，选出高效表达的工程菌。据图分析，构建重组载体DNA分子时，可以选用

酶B与酶C

酶B与酶C

两种限制酶对质粒pBR322和干扰素基因进行双酶切，目的是既能保证目的基因和质粒正向连接，又能防止

目的基因或载体的自身连接

目的基因或载体的自身连接

（答1点）。将重组质粒导入大肠杆菌中，然后将细菌涂布到含

氨苄青霉素

氨苄青霉素

的选择培养基上培养，就可得到含质粒PBR322或重组质粒的细菌单菌落。