番茄的果实营养丰富，具特殊风味，是深受人们喜爱的蔬果，但番茄不抗冻，在我国冬季无法栽培。现有科研人员利用转基因技术，将北极海鱼中的抗冻基因转入到了番茄细胞中，从而培育成功抗冻番茄。导入目的基因的方法是农杆菌转化法，图1为培育过程使用的Ti质粒，已知Vir区的基因活化能促进T-DNA的加工和转移。回答下列问题：
（1）若经过诱变，北极海鱼的一条染色体上的抗冻基因发生了碱基对的替换，导致抗冻能力大大增强，通过琼脂糖凝胶电泳，能否区分突变前后的两个抗冻基因？不能不能，请说明理由 因为碱基对的替换，突变前后基因长度相同，无法通过琼脂糖凝胶电泳区分因为碱基对的替换，突变前后基因长度相同，无法通过琼脂糖凝胶电泳区分。
（2）对于目的基因的获取，研究人员提取了抗冻蛋白，根据氨基酸序列分析了mRNA的碱基序列，继而合成了抗冻基因，通过这种方法得到的目的基因因不含 复制起点复制起点、启动子和终止子启动子和终止子，故无法扩增和表达。选择图示Ti质粒构建基因表达载体，应选择限制酶 ⅢⅢ（填“Ⅰ”或“Ⅱ”或“Ⅲ”），不选其它限制酶的理由是 限制酶Ⅰ会破坏四环素抗性基因，影响后续含目的基因的受体细胞的筛选，限制酶Ⅱ会破坏Vir区基因，影响目的基因的转移限制酶Ⅰ会破坏四环素抗性基因，影响后续含目的基因的受体细胞的筛选，限制酶Ⅱ会破坏Vir区基因，影响目的基因的转移。
（3）为筛选成功导入抗冻基因的番茄细胞，在培养基中添加 四环素四环素。将筛选后获得的番茄细胞经 脱分化脱分化过程形成愈伤组织后，经器官发生途径或 体细胞胚发生体细胞胚发生途径发育形成植株，再在 低温/寒冷低温/寒冷条件下筛选出具有抗冻性状的番茄植株。
（4）研究人员想比较不同转基因番茄中抗冻蛋白的合成量，制备相应的单克隆抗体，利用图2所示原理进行检测。
①检测前，先将抗冻蛋白的单克隆抗体固定在支持物上，然后向该检测体系中加入一定量的番茄植株中提取的蛋白质（待测抗原）和等量酶标记抗冻蛋白（酶标记抗原），目的是让待测抗原、酶标记抗原与抗体 竞争性竞争性结合。
②保温一段时间后洗涤，再向检测体系中加入一定量的白色底物，若检测体系蓝色越 浅浅，则说明番茄提取物中抗冻蛋白的含量越高。
③本检测方法中的单克隆抗体可经杂交瘤细胞体外培养或注射到小鼠腹腔克隆化培养后，分别从 细胞培养液细胞培养液、小鼠腹水小鼠腹水中提取。
【考点】基因工程的操作过程综合；单克隆抗体及其应用．
【答案】不能；因为碱基对的替换，突变前后基因长度相同，无法通过琼脂糖凝胶电泳区分；复制起点；启动子和终止子；Ⅲ；限制酶Ⅰ会破坏四环素抗性基因，影响后续含目的基因的受体细胞的筛选，限制酶Ⅱ会破坏Vir区基因，影响目的基因的转移；四环素；脱分化；体细胞胚发生；低温/寒冷；竞争性；浅；细胞培养液；小鼠腹水
【解答】
【点评】
声明：本试题解析著作权属菁优网所有，未经书面同意，不得复制发布。
发布：2024/6/27 10:35:59组卷：33引用：2难度：0.6
相似题
-
1．下列有关基因工程技术和蛋白质工程技术叙述正确的是（ ）
发布：2025/1/5 8:0:1组卷：6引用：1难度：0.7 -
2．下列有关基因工程的叙述，正确的是（ ）
发布：2024/12/31 5:0:5组卷：3引用：2难度：0.7 -
3．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6
