苯丙酮尿症是单基因遗传病，科学家将正常基因D导入该病患者的细胞，以治疗该病。图甲为A、B、C三种质粒，图乙为含有目的基因D的DNA片段，图丙为重组载体的示意图。Ap为氨节青霉素抗性基因，Tc为四环素抗性基因，lacZ为蓝色显色基因，其表达产物可以将无色化合物X-gal转化成蓝色物质，使菌落呈蓝色，EcoRI（0.7Kb）、PvuI（0.8Kb）为限制酶及其切割位点与复制原点之间的距离。回答下列问题：
（1）基因工程操作的核心步骤是基因表达载体的构建基因表达载体的构建。图甲中三种质粒适宜作为运载体的是质粒BB，与另外两种质粒相比，其作为载体的优点是有标记基因，复制原点不会被限制酶切割有标记基因，复制原点不会被限制酶切割。
（2）获取目的基因D时应选择乙图中的PvuIPvuI对其所在的DNA进行切割。如果仅知道D基因首尾的部分核苷酸序列，根据D基因已知核苷酸序列合成引物引物，利用PCR扩增目的基因。
（3）将目的基因D和甲图中相应质粒连接后，得到图丙中三种方式。为选出正向连接的重组质粒，使用EcoRIEcoRI对质粒完全酶切后，进行电泳分析。若是正向连接载体，电泳图谱中出现长度为1.21.2Kb和5.55.5Kb两条带。
（4）利用自身不含lacZ基因且对抗生素敏感的大肠杆菌作为受体细胞，要在已转化的含重组质粒、已转化的含空质粒的受体细胞和未转化成功的细胞中筛选出已转化的含重组质粒的受体细胞的方法是在含有氨苯青霉素和X-gal的培养基上培养，形成白色菌落的为导入重组质粒的受体细胞在含有氨苯青霉素和X-gal的培养基上培养，形成白色菌落的为导入重组质粒的受体细胞。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】基因表达载体的构建；B；有标记基因，复制原点不会被限制酶切割；PvuI；引物；EcoRI；1.2；5.5；在含有氨苯青霉素和X-gal的培养基上培养，形成白色菌落的为导入重组质粒的受体细胞
【解答】
【点评】
声明：本试题解析著作权属菁优网所有，未经书面同意，不得复制发布。
发布：2024/6/27 10:35:59组卷：81引用：4难度：0.7
相似题
-
1．下列有关基因工程技术和蛋白质工程技术叙述正确的是（ ）
发布：2025/1/5 8:0:1组卷：6引用：1难度：0.7 -
2．下列有关基因工程的叙述，正确的是（ ）
发布：2024/12/31 5:0:5组卷：3引用：2难度：0.7 -
3．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6
