丙肝病毒（HCV）是一种RNA病毒，人们将得到的HCV的多个抗原基因首尾相连，连接在同一调控元件下，可构成融合基因。对HCV感染的诊断步骤是：首先进行抗HCV抗体检测，若检测结果呈阳性则还需要进行HCV核酸检测。HCV融合抗原可用于制作第三代HCV抗体检测试剂。请回答下列问题：
  （1）首先需要获得融合基因。即通过相关的RNA合成cDNA然后拼接起来，这个过程主要需要

逆转录

逆转录

酶和DNA连接酶等。其次要利用PCR技术扩增融合基因。即先根据融合基因的核苷酸序列，设计并合成引物，若该融合基因的序列如图2（虚线处省略了部分核苷酸序列），则PCR设计应选用的两种引物（部分）序列应分别为：①5′-AACTAT-3′，②

5′-AGAGGC-3′（或 3′-CGGAGA-5′）

5′-AGAGGC-3′（或 3′-CGGAGA-5′）

。引物能与变性的融合基因单链结合，在

Taq 酶

Taq 酶

催化作用下延伸，如此循环多次。
（2）构建融合基因表达载体。如图1所示，表达载体上除了标注的DNA片段外，在融合基因上游还必须拥有的DNA片段（箭头所示）是

启动子

启动子

，其作用是

为RNA聚合酶的识别和结合的位点，驱动融合基因转录出mRNA

为RNA聚合酶的识别和结合的位点，驱动融合基因转录出mRNA

。
（3）用融合基因表达载体转化大肠杆菌感受态细胞。用含硫酸卡那霉素的培养基筛选出能生长的菌落，从而得到能产生HCV融合抗原的工程菌，原非感受态受体大肠杆菌细胞内应

不含有

不含有

（填“含有”或“不含有”）硫酸卡那霉素抗性基因。
（4）某人体内HCV抗体检测结果呈阳性，但进行HCV核酸检测时结果呈阴性，最可能的原因是

其感染HCV后通过免疫反应已将HCV清除，但体内存在抗HCV抗体

其感染HCV后通过免疫反应已将HCV清除，但体内存在抗HCV抗体

。