科研小组利用基因工程技术将“抗虫基因”转入棉花细胞成功培育出抗虫棉，该技术所用的含“抗虫基因”的DNA与质粒上相关限制酶的酶切位点分别如图1、图2所示（不同限制酶的识别序列和酶切位点：BamHⅠ5′-G↓GATCC-3′，BclⅠ5′-T↓GATCA-3′，Sau3AⅠ5′-↓GATC-3′，HindⅢ5′-A↓AGCTT-3′）。请分析并回答下列问题：
（1）通过PCR扩增获得“抗虫基因”时，依据 目的基因的脱氧核苷酸序列目的基因的脱氧核苷酸序列设计引物，引物的作用是 使DNA聚合酶（Taq酶）从引物的3′端开始连接脱氧核苷酸使DNA聚合酶（Taq酶）从引物的3′端开始连接脱氧核苷酸。
（2）培育转基因抗虫棉的核心工作是 构建基因表达载体构建基因表达载体。科研人员分别使用HindⅢ和Sau3AⅠ两种限制酶处理含目的基因的DNA片段，用HindⅢ和BamHⅠ两种限制酶处理质粒，试分析切割质粒时用限制酶BamHⅠ替换Sau3AⅠ的原因 限制酶Sau3AⅠ和BamHⅠ酶切以后产生相同的黏性末端限制酶Sau3AⅠ和BamHⅠ酶切以后产生相同的黏性末端。
（3）欲确定“抗虫基因”是否表达出“抗虫蛋白”，在分子水平上的检测方法是 抗原-抗体杂交抗原-抗体杂交，该方法的原理是 抗体与相应的抗原发生特异性免疫反应抗体与相应的抗原发生特异性免疫反应。
（4）生产上常将转基因抗虫棉与非转基因棉花混合播种，目的是 减缓棉铃虫种群抗虫基因频率的增加速度减缓棉铃虫种群抗虫基因频率的增加速度。
（5）在基因工程的操作过程中，标记基因在检测目的基因是否导入受体菌方面广泛应用。环丝氨酸辅助筛选法：四环素能使细菌停止生长但不致死；环丝氨酸能使正常生长的细菌致死，而对停止生长的细菌不致死。某质粒如图3所示（Ampr表示氨苄青霉素抗性基因，Tetr表示四环素抗性基因），Tetr中插入目的基因后失活。
用此质粒构建表达载体，转化细菌后，结果有3种：未转化的细菌（无外源DNA进入）、含空质粒（没有连接目的基因的质粒）的细菌、含重组质粒的细菌。
①用含有 四环素四环素和 环丝氨酸环丝氨酸的培养基对上述3种细菌进行筛选，只有含空质粒的细菌被淘汰，理由是 含空质粒的细菌环丝氨酸使其致死含空质粒的细菌环丝氨酸使其致死。
②在上述筛选的基础上，若要筛选出含重组质粒的细菌，还需使用含有 氨苄青霉素氨苄青霉素的培养基。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】目的基因的脱氧核苷酸序列；使DNA聚合酶（Taq酶）从引物的3′端开始连接脱氧核苷酸；构建基因表达载体；限制酶Sau3AⅠ和BamHⅠ酶切以后产生相同的黏性末端；抗原-抗体杂交；抗体与相应的抗原发生特异性免疫反应；减缓棉铃虫种群抗虫基因频率的增加速度；四环素；环丝氨酸；含空质粒的细菌环丝氨酸使其致死；氨苄青霉素
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：11引用：2难度：0.6
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（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6
