特异性重组的Cre/loxP敲除系统是首先利用同源重组将基因组上的靶基因替换为两端带有重组位点loxP的karR基因，然后由重组酶Cre识别loxP位点并发生重组反应，去除基因组上的karR基因，进一步利用质粒的温敏特性将其消除，从而实现靶基因的敲除。如图是研究人员利用Cre/loxP敲除系统敲除谷氨酸棒状杆菌argR基因（精氨酸代谢的调控因子），获得高产精氨酸菌株的过程，其中kanR是卡那霉素抗性基因，cat是氯霉素抗性基因，HindⅢ、BanHⅠ是限制酶。请据图回答下列问题：
（1）①过程的原料是 dNTPdNTP，所需的酶是 Taq酶Taq酶。
（2）下列引物1、引物2用于扩增argR基因上游序列，引物3、引物4用于扩增argR基因下游序列，下划线序列是相关限制酶识别序列，则HindⅢ、BamHⅠ的识别序列分别是 AAGCTTAAGCTT、GGATCCGGATCC。
引物1：5'-GTCGACGGTATCGATAAGCTTAGGACTCAAACTTATGACTTCACAACCA-3'
引物2：5-CGCCCTATAGTGAGTCGTATTGGGATTTAAGTTTTCCGGTGTTGACG-3'
引物3：5'-CTTTAGTGAGGGTTAATTGCGCGTTAATCGCTTGTTAATGCAGGCA-3'
引物4：5'-CGCTCTAGAACTAGTGGATCCCAAAGCCTCGTGAGCCTTAATC-3'
（3）②过程（融合PCR）是采用具有互补末端引物，形成具有重叠链的PCR引物，通过PCR引物重叠链的延伸，从而将不同来源的DNA片段连接起来。下列引物5、引物6用于扩增两端含loxP的karR片段，引物5、引物6可分别与 引物2引物2、引物3引物3（引物1、引物2、引物3、引物4）重叠从而实现不同DNA片段的连接。
引物5：5'-CGTCAACACCGGAAAACTTAAATCCCAATACGACTCACTATAGGGCG-3'
引物6：5-TGCCTGCATTAACAAGCGATTAACGCGCAATTAACCCTCACTAAAG-3'
（4）④过程将质粒3导入 感受感受态谷氨酸棒状杆菌，⑤过程在同源重组的作用下谷氨酸棒状杆菌株的argR基因被替换为 两端含有loxP位点的karR两端含有loxP位点的karR片段。
（5）⑥过程导入质粒4的目的是 利用重组酶Cre识别loxP位点并发生重组反应，去除基因组上的karR基因利用重组酶Cre识别loxP位点并发生重组反应，去除基因组上的karR基因。
（6）由于质粒4的温敏特性，⑦过程先在37℃条件下培养消除质粒4，然后用影印接种（A、B、C三个培养基中接种菌种的位置相同）培养验证其抗性，其结果如下图，则 能在A培养基上生长，不能在B、C培养基上生长的菌株能在A培养基上生长，不能在B、C培养基上生长的菌株是目的基因被敲除的目的菌株。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】dNTP；Taq酶；AAGCTT；GGATCC；引物2；引物3；感受；两端含有loxP位点的karR；利用重组酶Cre识别loxP位点并发生重组反应，去除基因组上的karR基因；能在A培养基上生长，不能在B、C培养基上生长的菌株
【解答】
【点评】
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发布：2024/4/20 14:35:0组卷：48引用：3难度：0.6
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（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6
