内皮素（ET）是一种含21个氨基酸的多肽，具有强烈的促进血管收缩和促进平滑肌细胞增殖等作用，其功能异常与高血压、糖尿病、癌症等有着密切联系。内皮素（ET）主要通过与靶细胞膜上的ET受体（ETA）结合而发挥生物学效应。科研人员通过构建表达载体，实现ETA基因在大肠杆菌细胞中的高效表达，其过程如图所示，图中SNAP基因是一种荧光蛋白基因，限制酶Apa I的识别序列为
，限制酶Xho I的识别序列为
。
请据图分析回答：
（1）进行过程①时，需要加入缓冲液、引物、脱氧核苷酸和 逆转录逆转录酶等。完成过程①②③的目的是 获取目的基因（ETA）基因获取目的基因（ETA）基因。
（2）过程③和⑤中，限制酶Xho I切割DNA，使 磷酸二酯磷酸二酯键断开，形成的黏性末端是 
。用两种限制酶切割，获得不同的黏性末端，其主要目的是 使目的基因定向连接到运载体上（或防止目的基因环化）使目的基因定向连接到运载体上（或防止目的基因环化）。
（3）构建的重组表达载体，目的基因上游的启动子是 RNA聚合酶识别和结合RNA聚合酶识别和结合的部位，进而可驱动基因的转录。除图中已标出的结构外，基因表达载体还应具有的结构是 复制原点、终止子复制原点、终止子。
（4）过程⑥要用CaCl2预先处理大肠杆菌，使其成为容易吸收外界DNA的 感受态感受态细胞。
（5）将SNAP基因与ETA基因结合构成融合基因，其目的是有利于检测 ETA基因能否表达及表达量ETA基因能否表达及表达量。
（6）大肠杆菌等原核生物不仅可以作为基因工程的受体细胞，它们往往还含有一些有重要价值的外源基因，而这些外源基因无需改造和修饰就可在叶绿体中高效表达，原因是 叶绿体DNA与原核生物DNA结构类似叶绿体DNA与原核生物DNA结构类似。基因工程操作时可将外源基因整合到叶绿体基因组中，不仅能有效改良植物的品质，还由于叶绿体转基因不会随 花粉花粉（“花粉”或“卵细胞”）传给后代，从而能在一定程度上避免转基因作物中的外源基因扩散到其他同类作物。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】逆转录；获取目的基因（ETA）基因；磷酸二酯；；使目的基因定向连接到运载体上（或防止目的基因环化）；RNA聚合酶识别和结合；复制原点、终止子；感受态；ETA基因能否表达及表达量；叶绿体DNA与原核生物DNA结构类似；花粉
；使目的基因定向连接到运载体上（或防止目的基因环化）；RNA聚合酶识别和结合；复制原点、终止子；感受态；ETA基因能否表达及表达量；叶绿体DNA与原核生物DNA结构类似；花粉【解答】
【点评】
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发布：2024/4/20 14:35:0组卷：18引用：1难度：0.7
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