某水稻品种体内含有基因Q,该基因在水稻体细胞和精子中正常表达,但在卵细胞中该基因不能与RNA聚合酶结合而无法表达。为了获得基因Q能够表达的卵细胞,研究人员进行了相关研究。回答下列问题:
(1)为了获取基因Q中编码蛋白质的核苷酸序列,可从水稻体细胞或精子体细胞或精子细胞中提取总RNA,然后经逆转录后构建基因文库基因文库。
(2)将基因Q中编码蛋白质的序列与Luc基因(荧光素酶基因,荧光素酶能催化荧光素产生荧光)拼接成Q-Luc融合基因(融合基因中的Q和Luc基因都能独立表达),拼接过程需要的酶是DNA连接酶DNA连接酶。将融合基因插入到Ti质粒的T-DNAT-DNA中,利用农杆菌转化农杆菌转化法可将融合基因转入水稻愈伤组织。
(3)与诱导愈伤组织的培养基相比,将愈伤组织培育成转基因植株时,培养基组成成分的主要区别是植物激素种类及比例不同植物激素种类及比例不同,培养条件的主要差异是需要光照需要光照。
(4)将转基因水稻培育成熟后,其卵细胞中的基因Q能够进行正常表达,推测可能的原因是T-DNA的启动子可与卵细胞中的RNA聚合酶结合T-DNA的启动子可与卵细胞中的RNA聚合酶结合。在分离并培养转基因水稻卵细胞的过程中,可以筛选出能够表达基因Q的卵细胞,筛选的方法是向培养基中加入荧光素,筛选出能产生荧光的细胞向培养基中加入荧光素,筛选出能产生荧光的细胞。
【考点】基因工程的操作过程综合.
【答案】体细胞或精子;基因文库;DNA连接酶;T-DNA;农杆菌转化;植物激素种类及比例不同;需要光照;T-DNA的启动子可与卵细胞中的RNA聚合酶结合;向培养基中加入荧光素,筛选出能产生荧光的细胞
【解答】
【点评】
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