塑料中含有的双酚A（BPA）可在生物体内富集，导致生物体内分泌系统失衡和紊乱。漆酶是一类蓝色胞外含铜多酚氧化酶，能使愈创木酚氧化产生红褐色物质，能有效降解BPA，广泛分布于白腐真菌中。科研人员欲从土壤中筛选和分离出高产漆酶的菌株，构建高效的BPA处理方法，实验思路。
（1）培养基的配制：
PDA培养基：土豆20%+葡萄糖20%+琼脂2%+水：
G-PDA培养基：PDA培养基+0.04%愈创木酚+100μg/mL氨苄青霉素；
（2）菌种的分离：
采集林下土样加入

无菌水

无菌水

制成土壤悬液，利用

涂布分离

涂布分离

法接种于G-PDA培养基平板上，将其

倒置

倒置

于30℃恒温培养箱中培养，每隔24h观察

变色圈大小、颜色深浅、显色时间

变色圈大小、颜色深浅、显色时间

等指标来衡量产漆酶的能力。
（3）粗酶液的制备：
将分离出的菌株接种于液体产酶培养基中，30℃恒温振荡培养7d,培养液经离心后取

上清液

上清液

作为粗酶液。漆酶的产量受发酵液初始pH、培养温度

碳源的种类和浓度、氮源的种类和浓度、Cu²⁺浓度、培养时间

碳源的种类和浓度、氮源的种类和浓度、Cu²⁺浓度、培养时间

 （至少两点）因素的影响。
（4）酶的应用：
游离的漆酶的催化活性易受环境因素等影响，且难

重复使用

重复使用

，利

固定化酶

固定化酶

技术，可显著增强漆酶的利用率和对废水中BPA的去除效益。
（二）自然界中只有极少数原核微生物能固氮，而大多数农作物不具备固氮能力，近些年来人们尝试通过植物细胞工程的两条途径来培养固氮植株。
（1）途径一：
①获得目的基因：若固氮基因片段是已知的，可用

PCR （扩增）

PCR （扩增）

或

化学合成

化学合成

方法获得。
②形成重组DNA分子并导入受体细胞：将固氮基因与载体DNA连接在-起，常选用

Ti质粒

Ti质粒

作为该基因的载体使用，之后把形成的重组DNA分子导入植物细胞：
③筛选与表达：若受体细胞转入

无氮（源）

无氮（源）

培养基中仍能继续生长发育，说明固氮基因已在受体细胞中表达；
④植物组织培养：分离上述成功表达固氮基因的单个植物细胞，经过培养基中成分诱导，可发生类似受精卵经过卵裂、分化、

器官发生

器官发生

和形态建成而发育成胚的过程，之后培养获得具有固氮能力试管苗.
（2）途径二：将植物细胞

纤维素酶和果胶

纤维素酶和果胶

酶处理得到的原生质体与去壁后的固氮菌进行

细胞融合

细胞融合

，再通过培养获得具有固氮能力的试管苗。
（3）上述两条途径获得的试管苗数量不够，需在初代培养后连续数代扩大繁殖，

继代培养

继代培养

过程。