[选修1：生物技术实践]
反硝化细菌能在无氧环境中将硝酸盐转化为氮气（2NO₃^-+10e^-+12H⁺→…→N₂O→N₂），在处理工业污水、治理水体富营养化中具有重要作用。科研人员想从一污水处理厂的活性污泥中筛选分离出耐高温（42℃）的反硝化细菌（目的菌），用于提升温度较高的工业污水的脱氮效率，具体流程如图所示（BTB培养基初始pH=6.8，BTB是酸碱指示剂，酸性条件下为黄色，中性条件下为绿色，碱性条件下为蓝色）：

（1）BTB培养基灭菌后待平板凝固后，应倒置放在超净台上，目的是

防止皿盖上的水珠落入培养基，避免培养基中的水分过快的挥发

防止皿盖上的水珠落入培养基，避免培养基中的水分过快的挥发

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（2）将污泥样品梯度稀释后，使用

涂布器

涂布器

（填工具）将样液均匀涂布在BTB培养基上，放在

无氧、42℃

无氧、42℃

环境中培养2～3天后，挑选显

蓝

蓝

色的单菌落在固体培养基上划线分离，获得纯菌株。
（3）将纯菌株接种在液体培养基上培养一段时间，若在培养瓶顶部检测到N₂O，即可鉴定为目的菌。不能依据培养液中硝酸盐的浓度变低来鉴定目的菌，原因是

其他微生物也能利用硝酸盐进行代谢，硝酸盐浓度同样会降低

其他微生物也能利用硝酸盐进行代谢，硝酸盐浓度同样会降低

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（4）为保持纯化后的微生物菌种的纯净，需要对菌种进行保藏。临时保藏的方法具有

保存时间短、容易被污染或产生变异

保存时间短、容易被污染或产生变异

等缺点，它比较适合那些使用频率高的菌种的保藏。
（5）C/N（碳氮含量比）对反硝化效率有一定的影响。科研人员测得不同C/N条件下目的菌对硝酸盐的去除率，结果如图所示：

科研人员提出，在利用目的菌株处理工业污水时，需要适当向污水中投放少量淀粉，据图分析这样做的主要目的是

适当提高污水中的C/N，从而提高目的菌对污水中硝酸盐的去除率

适当提高污水中的C/N，从而提高目的菌对污水中硝酸盐的去除率

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（6）为计数微生物的数量，一位同学在4个平板培养基上分别接种稀释倍数为10⁶的土壤样液0.1mL，培养后菌落数分别为155、160、176、149个，则每毫升原土壤样液中上述微生物数量为

1.6×10⁹

1.6×10⁹

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