某研究团队从沙漠野生柽柳中克隆出了一个耐盐碱基因TcSR1。该团队用限制酶BalⅡ切割目的基因TcSR1，用限制酶BamHⅠ切割质粒载体V3，两种限制酶的识别序列及酶切位点如图所示，经过体外重组和转化，最终获得了能够在盐碱地生长的杨树新品种。回答下列问题：
（1）使用限制酶BalⅡ和BamHⅠ切割得到的DNA片段末端均是 黏性黏性末端，用两种酶分别切割目的基因和质粒载体V3后，再用 DNA连接DNA连接酶处理，以构建基因表达载体，质粒载体V3一般应具有 标记基因标记基因以供重组DNA的筛选。
（2）将目的基因导入杨树细胞，最常采用的方法是 农杆菌转化法农杆菌转化法。若要检测杨树植株中目的基因TcSR1是否发生转录，可采用 分子杂交分子杂交技术，需要将 放射性同位素标记的基因TcSR1放射性同位素标记的基因TcSR1片段制成探针，通过检测放射性达到目的。
（3）植物组织培养技术与基因工程技术相结合可获得转基因植株，将含有目的基因的细胞培养成一个完整植株的基本程序是 转基因细胞脱分化愈伤组织再分化完整植物转基因细胞脱分化愈伤组织再分化完整植物（用流程图表示）。
脱分化
再分化
脱分化
再分化
【考点】基因工程的操作过程综合；植物的组织培养．
【答案】黏性；DNA连接；标记基因；农杆菌转化法；分子杂交；放射性同位素标记的基因TcSR1；转基因细胞愈伤组织完整植物
脱分化
再分化
【解答】
【点评】
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发布：2024/4/20 14:35:0组卷：10引用：2难度：0.6
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3．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6
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