对疑似PRRS（猪繁殖与呼吸综合征）的病料（从得病的动物身上采集的组织或器官）进行病毒分离鉴定，获得一株高致病性PRRSV（猪繁殖与呼吸综合征病毒），通过对高致病性PRRSV的N蛋白进行研究来探讨该蛋白的抗原特性，并制备抗N蛋白的单克隆抗体。回答下列问题：
（1）PRRSV N蛋白基因的克隆：提取PRRSV中的总RNA，以其中相应的RNA作为模板，利用逆转录逆转录酶逆转录成cDNA．再以cDNA为模板进行PCRPCR扩增，而获得N蛋白基因。
（2）表达N蛋白细胞的制备：用重组质粒转化转化合适的大肠杆菌细胞，为提高该过程的效率，需考虑重组质粒的质量和浓度质量和浓度等。将筛选过的受体细胞37℃培养液培养。
（3）单克隆抗体的制备与检测：取免疫小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合待融合细胞生长到培养孔底面积的110时进行抗体抗体（填物质）筛选。检出的阳性孔用有限稀释法进行多次克隆化，建立单克隆抗体细胞株细胞株。最终获得的单克隆抗体是否达到实验要求的标志是N蛋白可与抗N蛋白的单抗发生特异性的结合N蛋白可与抗N蛋白的单抗发生特异性的结合，与无关蛋白不发生反应。
（4）猪干细胞的应用：胚胎干细胞可以进行基因敲除基因敲除，获得适合猴子移植的猪器官，减弱或消除排斥反应。
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【考点】单克隆抗体及其应用．
【答案】逆转录；PCR；转化；质量和浓度；抗体；细胞株；N蛋白可与抗N蛋白的单抗发生特异性的结合；基因敲除
【解答】
【点评】
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发布：2024/4/20 14:35:0组卷：20引用：2难度：0.7
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发布：2024/12/31 1:30:1组卷：7引用：3难度：0.6 -
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（1）与植物体细胞杂交相比，图2中过程②特有的诱导融合的方法是，过程②选用的骨髓瘤细胞（选填“能”或“不能”）在HAT培养基上生长。
（2）对③筛选出的杂交瘤细胞，还需进行和，才能筛选出足够量的既能无限增殖又能产生特异性抗体的杂交瘤细胞。与传统血清抗体相比，单克隆抗体最主要的优点是（答出一点）。
（3）图2中①步骤注射癌胚抗原的目的是。图2方框内需要经过次筛选，才能获取单克隆杂交—杂交瘤细胞。体外培养到一定时期的单克隆杂交—杂交瘤细胞会因为、有害代谢物的积累和培养液中营养物质缺乏等因素而分裂受阻，需进行传代培养。
（4）与直接使用长春碱相比，将长春碱与双特异性单克隆抗体结合后给药，对人体的副作用更小，原因是。发布：2024/12/31 1:30:1组卷：21引用：4难度：0.5 -
3．使用高效的细胞毒素药物进行化疗可以有效杀伤肿瘤细胞但细胞毒素没有特异性，在杀伤肿瘤细胞的同时还会对健康细胞造成伤害。这限制了它在临床上的应用。抗体一药物偶联物（ADC）通过将细胞毒素与能特异性识别肿瘤抗原的单克隆抗体结合，实现了对肿瘤细胞的选择性杀伤ADC通常由抗体、接头和药物（如细胞毒素）三部分组成，它的作用机制如图所示。下列叙述正确的是（ ）
发布：2024/12/31 3:30:1组卷：18引用：2难度：0.7
