真核基因的转录激活因子是两种相对独立的蛋白质BD和AD组成的复合物，BD负责识别基因上游特定的DNA序列并与之结合（不同基因的BD不同），AD负责活化转录过程，两者单独作用时都不能启动转录。在科学研究中，往往利用该原理判断两种蛋白质能否相互作用。具体过程为：让BD基因与诱饵蛋白基因融合，让AD基因与待测蛋白基因融合，并让它们在酵母菌中表达出相应的融合蛋白，若诱饵蛋白与待测蛋白可以相互作用，则AD和BD就能充分接近形成复合物，并启动标记基因的表达。具体过程如图1：
（1）构建重组质粒甲时使用双酶切可以有效防止目的基因与质粒

自身环化、反向连接

自身环化、反向连接

；用EcoRⅠ和SalⅠ双酶切后，检测样品1、2中是否含有重组质粒乙，电泳结果为图2，其中

1

1

号样品为成功插入AD—待测蛋白基因的重组质粒。
（2）质粒导入前，Y2H酵母菌母液需用无菌的Ca²⁺处理，推测其目的是

使Y2H酵母菌细胞处于一种能吸收周围环境中DNA的生理状态

使Y2H酵母菌细胞处于一种能吸收周围环境中DNA的生理状态

。与原核细胞相比，由于酵母菌

有内质网和高尔基体对蛋白质进行加工

有内质网和高尔基体对蛋白质进行加工

，故蛋白质的空间构象不受影响，这也是选择其作为受体细胞的原因之一。
（3）野生型Y2H酵母菌缺乏His3（组氨酸合成基因）和Mell（半乳糖苷酶合成基因），故可将这两种基因作为标记基因导入Y2H酵母菌将其制备成受体菌，来判断诱饵蛋白与待测蛋白能否相互作用。（已知在培养基中含有X—gal的情况下，半乳糖苷酶的分泌可使酵母菌落呈蓝色）
①将重组质粒甲和乙导入受体菌后，若受体菌菌落在不含组氨酸的平板上能存活且在含有X—gal的平板上呈现蓝色，则说明诱饵蛋白和待测蛋白能相互作用，理由是

诱饵蛋白与待测蛋白可以相互作用，则AD和BD就能充分接近形成复合物，并启动两种标记基因表达

诱饵蛋白与待测蛋白可以相互作用，则AD和BD就能充分接近形成复合物，并启动两种标记基因表达

。
②请设计实验排除BD—诱饵融合蛋白单独激活两种标记基因的可能。（写出实验思路和结果）