某小组为研究真菌基因m的功能，构建了融合表达蛋白M和tag标签的质粒。请结合实验流程回答下列问题。
（1）目的基因的扩增
①提取真菌细胞 mRNAmRNA，经逆转录获得cDNA，进一步获得基因m片段。
②为了获得融合tag标签的蛋白M，设计引物P2时，不能包含基因m终止密码子的编码序列，否则将导致 蛋白M上不含tag标签蛋白M上不含tag标签。
（2）重组质粒的构建
①将SmaⅠ切开的载体A与添加同源序列的m混合，用特定DNA酶处理形成 黏性末端黏性末端，然后降温以促进 黏性末端碱基互补配对黏性末端碱基互补配对，形成A-m结合体。将A-m结合体导入大肠杆菌，利用大肠杆菌中的DNA聚合酶及 DNA连接DNA连接酶等，完成质粒的环化。
②若正确构建的重组质粒A-m仍能被SmaⅠ切开，则SmaⅠ的酶切位点可能在 基因m的连接处、基因m的内部基因m的连接处、基因m的内部。
（3）融合蛋白的表达
①用含有尿嘧啶的培养基培养URA3基因缺失型酵母，将其作为受体菌，导入质粒A-m,然后涂布于 无尿嘧啶无尿嘧啶的培养基上，筛选获得目的菌株，其机理是 受体菌在无尿嘧啶的培养基上无法生长，导入重组质粒的受体菌含有URA3基因，可以长成菌落受体菌在无尿嘧啶的培养基上无法生长，导入重组质粒的受体菌含有URA3基因，可以长成菌落。
②若通过抗原—抗体杂交实验检测到酵母蛋白中含tag标签，说明 融合基因表达（或融合基因正确解码）融合基因表达（或融合基因正确解码），后续实验可借助tag标签进行蛋白M的分离纯化。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】mRNA；蛋白M上不含tag标签；黏性末端；黏性末端碱基互补配对；DNA连接；基因m的连接处、基因m的内部；无尿嘧啶；受体菌在无尿嘧啶的培养基上无法生长，导入重组质粒的受体菌含有URA3基因，可以长成菌落；融合基因表达（或融合基因正确解码）
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：18引用：1难度：0.6
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3．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6
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