人体内的t-PA蛋白能高效降解由纤维蛋白凝聚而成的血栓,是心梗和脑血栓的急救药。然而,为心梗患者注射大剂量的基因工程t-PA会诱发颅内出血,其原因在于t-PA与纤维蛋白结合的特异性不高。研究证实,将t-PA第84位的半胱氨酸换成丝氨酸,能显著降低出血副作用。据此,先对天然的t-PA基因进行序列改造,然后再采取传统的基因工程方法表达该改造后的基因,可制造出性能优异的改良t-PA蛋白。(注:如图表示相关的目的基因、载体及限制酶。pCLY11为质粒,新霉素为抗生素。)
请回答下列问题:
(1)以上制造出性能优异的改良t-PA蛋白的过程被称为 蛋白质蛋白质工程。
(2)已知人t-PA基因序列已测出,且第84位半胱氨酸的模板链碱基序列为ACA,而丝氨酸的模板链碱基序列为AGA,因此要获得改造后的目的基因最好采用 化学方法人工合成化学方法人工合成方法获得。
(3)若t-PA改良基因的粘性末端如图所示,那么需选用限制酶XmaⅠ和 BgLIIBgLII切开质粒pCLY11,才能与t-PA改良基因高效连接。在基因工程中,最核心的一步为 基因表达载体的构建基因表达载体的构建。
(4)一般选择在未加入新霉素的培养基中生存的大肠杆菌作为受体细胞,目的是 以便筛选出导入质粒pCLY1I的大肠杆菌以便筛选出导入质粒pCLY1I的大肠杆菌。在加入新霉素的培养基中形成菌落的受体细胞并非都是目的菌株,原因是 未连目的基因的质粒也可以在这种培养基上生长未连目的基因的质粒也可以在这种培养基上生长,这时需选择呈 白白色的菌落,进一步培养、检测和鉴定,以选育出能生产改良t-PA蛋白的工程菌株。
【考点】基因工程的操作过程综合.
【答案】蛋白质;化学方法人工合成;BgLII;基因表达载体的构建;以便筛选出导入质粒pCLY1I的大肠杆菌;未连目的基因的质粒也可以在这种培养基上生长;白
【解答】
【点评】
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