为提高小对磷元素的吸收能力，研究人员通过质粒P把水稻耐低磷因导入小麦细胞得到耐低磷转基因小麦，基本流程如图。质粒P含3种限制酶（NheⅠ、EcoRⅠ、SalⅠ）切割位点，全部切割可以得到F1、F2、F3、F4片段，标记基因和启动子分别位F1和F2片段中。耐低磷基因两侧的限制酶切割位点为NheⅠ和SalⅠ，据图回答下列问题：
（1）将目的基因导入植物细胞采用最多的方法是农杆菌转化农杆菌转化法，还有基因枪法和我国科学家独创的花粉管通道花粉管通道法。
（2）有人将质粒P用NheⅠ与SalⅠ双酶切割后，与耐低磷基因混合，加入DNA连接酶进行连接反应，得到的重组质粒不一定都是所需要的，原因是质粒P有两个NheⅠ的酶切位点，得到的重组质粒可能有：①只含F4和耐低磷基因②只含F3和耐低磷基因③F4、耐低磷基因和F2-F1片段（反向连接）④F3、耐低磷基因和F2-F1片段（反向连接）⑤F3、耐低磷基因和F1-F2片段。不符合要求质粒P有两个NheⅠ的酶切位点，得到的重组质粒可能有：①只含F4和耐低磷基因②只含F3和耐低磷基因③F4、耐低磷基因和F2-F1片段（反向连接）④F3、耐低磷基因和F2-F1片段（反向连接）⑤F3、耐低磷基因和F1-F2片段。不符合要求。因此，需采取以下步骤进行重组质粒的构建：
第一步，取质粒P用EcoRⅠEcoRⅠ和SalⅠSalⅠ酶切测，从中选取F1+F4F1+F4片段备用；
第二步，另取质粒P用EcoRⅠEcoRⅠ和NheⅠNheⅠ酶切割，从中选取FρFρ片段备用；
第三步，将耐低磷基因与前两步选取的片段用DNA连接酶连接即可得到所需重组质粒。
（3）剥取小麦种子的幼胚接种在诱导培养基上经脱分化脱分化形成愈伤组织，该过程需要的植物激素有细胞分裂素和生长素细胞分裂素和生长素，将重组质粒导入愈伤组织，培养一段时间后，还需要转移至分化分化培养基上。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】农杆菌转化；花粉管通道；质粒P有两个NheⅠ的酶切位点，得到的重组质粒可能有：①只含F4和耐低磷基因②只含F3和耐低磷基因③F4、耐低磷基因和F2-F1片段（反向连接）④F3、耐低磷基因和F2-F1片段（反向连接）⑤F3、耐低磷基因和F1-F2片段。不符合要求；EcoRⅠ；SalⅠ；F1+F4；EcoRⅠ；NheⅠ；Fρ；脱分化；细胞分裂素和生长素；分化
【解答】
【点评】
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发布：2024/4/20 14:35:0组卷：16引用：2难度：0.5
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（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6
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