人胰岛素基因表达的最初产物是一条肽链构成的前胰岛素原，经加工后形成两条肽链（A链和B链）的有生物活性的胰岛素。此后科学家又提出了利用基因工程改造大肠杆菌生产人胰岛素的两种方法：“AB”法是根据胰岛素A、B两条肽链的氨基酸序列人工合成两种DNA片段，利用工程菌分别合成两条肽链后将其混合自然形成胰岛素；“BCA”法是利用人体某细胞中的mRNA得到胰岛素基因，表达出胰岛素原后再用特定酶切掉C肽段。这两种方法使用同一种质粒作为载体。请据如图分析并回答下列问题：

（1）“BCA”法是利用人体

胰岛B

胰岛B

细胞中的mRNA，再由mRNA经

逆转录

逆转录

得到的胰岛素基因，

AB和BCA

AB和BCA

（填“AB”、“BCA”或“AB和BCA”）法获取的目的基因中不含人胰岛素基因启动子。
（2）如图是利用基因工程生产人胰岛素过程中使用的质粒及目的基因的部分结构。为使目的基因与载体正确连接，在设计PCR引物时可添加限制酶

XhoΙ和MunΙ

XhoΙ和MunΙ

的识别序列，PCR引物应该添加在识别序列的

3'

3'

（填“3′”或“5′”）端。通过上述方法获得人的胰岛素基因后，需要通过PCR技术进行扩增，若计划用1个胰岛素基因为模板获得m（m大于2）个胰岛素基因，则消耗的引物总量是

2m-2

2m-2

个。模板序列中的GC含量越高，对PCR过程中的

变性

变性

步骤（写出具体过程）影响最大，越

不利于

不利于

（填“有利于”或“不利于”）目标DNA的扩增。
（3）PCR扩增的产物一般通过琼脂糖凝胶电泳来鉴定，下列叙述中正确的有

BCD

BCD

。
A．PCR反应体系中需加入耐高温的DNA聚合酶，该酶主要在退火过程起作用
B．待测样品中DNA分子的大小和构象、凝胶的浓度等都会影响DNA在电泳中的迁移速率
C．进行电泳时，带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动
D．琼脂糖溶液中加入的核酸染料利于DNA在紫外灯下被检测
（4）β-半乳糖苷酶可以分解无色的X-gal产生蓝色物质使菌落呈现蓝色，否则菌落为白色。经

钙离子处理

钙离子处理

处理大肠杆菌后，与重组质粒混合培养一段时间，将大肠杆菌接种到添加了

氨苄青霉素

氨苄青霉素

和X-gal的培养基上筛选出

白

白

色的菌落即为工程菌种。