为了提高马铃薯对真菌病害的抗性，某科研小组进行了马铃薯转基因抗病育种的初步研究，其过程如下所示，请将其完善：
（1）从生防木霉菌株中提取总RNA以及通过 逆转录逆转录过程合成cDNA。
（2）利用PCR技术对目的基因Chi（抗菌基因）进行扩增；PCR产物与PMDTM18-T载体连接，转化到大肠杆菌，获得重组质粒PMDTM18-T-Chi。
（2）植物表达载体的构建（如图所示）：将重组质粒PMDTM18-T-Chi和p33ECR质粒用 BamHI和SacIBamHI和SacI（填具体酶）进行酶切，再用T4DNA连接酶连接，得到p33ECR-Chi。此过程中一般会使用高浓度的T4DNA连接酶，T4DNA连接酶的作用是 既可以“缝合”双链DNA片段互补的黏性末端，又可以“缝合“双链DNA片段的平末端既可以“缝合”双链DNA片段互补的黏性末端，又可以“缝合“双链DNA片段的平末端。表达载体中p35S是 RNA聚合酶RNA聚合酶识别和结合的部位。
（3）p33ECR-Chi工程菌的获得：将p33ECR-Chi质粒转化至农杆菌菌株中，在含 氨苄青霉素氨苄青霉素的培养基上获得白色菌斑，挑菌落，获得工程菌。
（4）转基因植株的获得：通过农杆菌转化法将Chi基因转化到马铃薯栽培品种试管马铃薯的块茎中。试管马铃薯的块茎是马铃薯遗传转化的理想外植体，分析其具有的优点是 取材方便、无需灭菌、周期短、转化效率高和不定芽能直接再生取材方便、无需灭菌、周期短、转化效率高和不定芽能直接再生（写出两点）。
（5）对马铃薯进行抗菌检测：从分子水平上可采用 抗原—抗体杂交抗原—抗体杂交法检测目的基因表达的产物；从个体水平上进行检测的操作是 霉菌接种实验霉菌接种实验。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】逆转录；BamHI和SacI；既可以“缝合”双链DNA片段互补的黏性末端，又可以“缝合“双链DNA片段的平末端；RNA聚合酶；氨苄青霉素；取材方便、无需灭菌、周期短、转化效率高和不定芽能直接再生；抗原—抗体杂交；霉菌接种实验
【解答】
【点评】
声明：本试题解析著作权属菁优网所有，未经书面同意，不得复制发布。
发布：2024/4/20 14:35:0组卷：8引用：3难度：0.6
相似题
-
1．下列有关基因工程技术和蛋白质工程技术叙述正确的是（ ）
发布：2025/1/5 8:0:1组卷：6引用：1难度：0.7 -
2．下列有关基因工程的叙述，正确的是（ ）
发布：2024/12/31 5:0:5组卷：3引用：2难度：0.7 -
3．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6
