原生质体制备需要在较高渗透压的甘露醇溶液中进行。为了探究原生质体制备中甘露醇的适宜浓度，某实验小组设计了以下实验。请以原生质体数目和体积变化为检测指标，根据提供的实验材料完善实验思路，预测实验结果并分析。
材料与用具：某植物单细胞悬液，2mol/L的甘露醇溶液，细胞壁水解酶，蒸馏水，培养瓶，血细胞计数板，显微镜（具有测距功能）等。
（要求与说明：原生质体计数和原生质体体积测量的具体操作过程不作要求，不考虑加入单细胞悬液对甘露醇溶液浓度的影响）
（1）实验思路：
①将2mol/L的甘露醇溶液按浓度梯度稀释后分为若干组，调节溶液

pH

pH

后加入各组培养瓶，再加入细胞壁水解酶。
②向各组培养瓶中加入适量的单细胞悬液。
③一段时间后，

用血细胞计数板和显微镜进行原生质体数目和体积测定

用血细胞计数板和显微镜进行原生质体数目和体积测定

。
④对实验数据进行统计分析。
（2）预测实验结果（设计一个坐标系，用曲线表示预测的实验结果）：

。
（3）分析与讨论
①除了酶解法以外，还可以将愈伤组织通过

液体悬浮培养

液体悬浮培养

法制备成单细胞悬液。
②可用血细胞计数板对原生质体进行计数，一般计数总数不少于300个细胞。现有一计数板，计数区共25个中格，每个中格有16个小格，采用五点采样法，计数的每个小格中应平均不少于

4

4

个原生质体（四舍五入取整数）。
③当甘露醇溶液浓度低于一定值时，原生质体的数目开始减少，原因是

甘露醇溶液浓度小于部分原生质体内部浓度，部分原生质体吸水涨破

甘露醇溶液浓度小于部分原生质体内部浓度，部分原生质体吸水涨破

，所以要使用较高浓度的甘露醇溶液；但是甘露醇溶液浓度也不能太高，因为浓度过高的甘露醇溶液会让原生质体

过度失水

过度失水

，从而降低原生质体活性。检测原生质体活性时可用细胞的

呼吸速率

呼吸速率

为指标。