某研究小组利用水稻细胞培育能产生HPV（人乳头瘤病毒）-LI蛋白的水稻胚乳细胞生物反应器，为获得HPV-L1蛋白提供一种新的高效、低廉的途径，用于制备HPV疫苗。其基本流程包括表达载体的构建、农杆菌转化、水稻细胞转化、转基因植株的筛选等步骤，最终获得能产生含HPV-L1蛋白胚乳细胞的转基因水稻。回答下列问题：
（1）目的基因的获取：根据研究目标，科研人员可以从 基因文库基因文库钓取HPV-L1基因，或者也可以分析HPV-L1蛋白的氨基酸序列，经 化学方法合成化学方法合成得到目的基因，随后，在合成基因的两端分别引入MlyⅠ和XhoⅠ酶切位点，目的基因两端设置不同酶切位点的目的是 使目的基因定向插入，减少自身环化，以便其正确转录和表达使目的基因定向插入，减少自身环化，以便其正确转录和表达。PCR是获取HPV-L1基因的一种方法，PCR反应体系设计的两种引物，在引物间和引物内的碱基都不能互补，其原因是 防止引物内或引物间结合形成双键，导致引物与DNA模板结合效率降低防止引物内或引物间结合形成双键，导致引物与DNA模板结合效率降低。
（2）农杆菌转化：科研人员构建了如图所示的表达载体，将其与经 氯化钙氯化钙处理成感受态的农杆菌细胞混合，并控制温度进行 液体悬浮液体悬浮培养，完成转化和细胞复苏，随后将菌液涂布在含 卡那霉素卡那霉素的培养基上培养，挑取菌落进行PCR鉴定后再扩大培养待用。
（3）水稻细胞转化：取水稻种子脱壳后经 消毒消毒处理，置于诱导培养基中发生 脱分化脱分化过程形成愈伤组织。挑取生长良好的愈伤组织加入到（2）中得到菌液中共培养，完成转化过程。为提高转化效率，下列措施中可以采用的是哪几项？ACAC。
A.不时摇动培养液
B.缩短培养时间
C.控制菌液中农杆菌浓度
D.降低培养温度
（4）转基因水稻的筛选：将转化处理后的水稻愈伤组织放在含抗生素的培养基中除菌处理后，转移至含有 潮霉素潮霉素的固体选择培养基中培养，并诱导出 根和芽分生组织或胚状体根和芽分生组织或胚状体，继续培养得到转基因水稻。
（5）为了检测是否成功导入HPV-L1基因并培育出能产生HPV-L1蛋白的水稻胚乳细胞生物反应器，请完善以下实验思路：
Ⅰ.分别提取纯化 胚乳细胞胚乳细胞的总DNA和蛋白质，经处理后分别固定在硝酸纤维素膜上。
Ⅱ.让待测DNA与HPV-L1基因探针发生 核酸分子杂交核酸分子杂交，放射自显影检测以确定目的基因已经成功导入。
Ⅲ.让待测蛋白质与 放射性HPV-L1蛋白抗体发生抗原-抗体杂交放射性HPV-L1蛋白抗体发生抗原-抗体杂交，放射自显影检测以确定目的基因已经成功表达。
【考点】基因工程的操作过程综合；植物的组织培养．
【答案】基因文库；化学方法合成；使目的基因定向插入，减少自身环化，以便其正确转录和表达；防止引物内或引物间结合形成双键，导致引物与DNA模板结合效率降低；氯化钙；液体悬浮；卡那霉素；消毒；脱分化；AC；潮霉素；根和芽分生组织或胚状体；胚乳细胞；核酸分子杂交；放射性HPV-L1蛋白抗体发生抗原-抗体杂交
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：29引用：1难度：0.6
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2．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
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（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
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