家畜胚胎的性别鉴定技术对畜牧业的发展具有重要意义。巢式PCR扩增反应在两次PCR反应中使用两组不同引物，先使用外引物对目标区域DNA片段进行第一次PCR扩增，产生中间产物，然后使用内引物对中间产物进行第二次PCR扩增，产生目标产物。如图1是式PCR工作原理示意图，请回答：
（1）巢式PCR反应体系中需要加入模板、DNA聚合酶DNA聚合酶、dNTP（原料）dNTP（原料）、引物、Mg2+、缓冲液等。
（2）相比于常规PCR获得的产物而言，巢式PCR获得的产物特异性 更强更强，原因是如果利用外引物扩增产生了错误片段，再利用内引物扩增在错误片段上进行引物配对并扩增的概率 升高升高。
（3）巢式PCR通常在一个试管中进行第一阶段反应，然后将中间产物等转移到第二试管中进行第二阶段反应，不在同一试管完成的主要原因是 防止引物配对特异性不强造成的非特异性扩增的污染防止引物配对特异性不强造成的非特异性扩增的污染。
（4）科研人员利用多重巢式PCR技术同时扩增Y染色体上雄性决定基因（SRY）和常染色体上的酪蛋白基因（CSN1S1），进行早期胚胎的性别鉴定，并将鉴定后的胚胎进行移植。表是主要实验步骤，请完成表：
| 实验目的 | 方法步骤要点 |
| 胚胎样品DNA提取 | 选取囊胚的① 滋养层 滋养层 细胞提取DNA |
| PCR引物的设计和合成 | 根据牛的SRY和CSN1S1基因序列设计合成② 2 2 对引物 |
| PCR过程 | 预变性→③ 变性 变性 →退火→延伸 |
| 观察扩增结果 | 电泳分析 |
| 受体牛④ 同期发情 同期发情 处理 |
对受体牛注射前列腺素 |
| 胚胎移植 | 将筛选出的胚胎移植到受体牛的子宫内 |
A
A
。可以确定1～5号中 1，2，4
1，2，4
号胚胎为雌性。（6）牛胚胎性别的鉴定除了可以利用PCR外，下列方法也可行的有
②③④
②③④
。①差速离心法
②核酸探针杂交法
③染色体核型分析法
④H-Y抗血清免疫学法（H-Y抗原编码基因位于Y染色体上）
【考点】DNA片段的扩增与电泳鉴定．
【答案】DNA聚合酶；dNTP（原料）；更强；升高；防止引物配对特异性不强造成的非特异性扩增的污染；滋养层；2；变性；同期发情；A；1，2，4；②③④
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：34引用：2难度：0.6
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1．数字PCR技术是一种核酸分子绝对定量技术，其原理如图所示。下列有关叙述正确的是（ ）
发布：2024/12/30 23:30:2组卷：7引用：2难度：0.6 -
2．科学家为了提高光合作用过程中Rubiaco酶对CO2的亲和力，利用PCR定点突变技术改造Rubisco酶基因，从而显著提高了植物的光合作用速率。请回答下列问题：
（1）PCR定点突变技术属于（填“基因工程”或“蛋白质工程”）。可利用定点突变的DNA构建基因表达载体，常用将基因表达载体导入植物细胞，还需用到植物细胞工程中的技术，才能最终获得转基因植物。
（2）PCR过程所依据的原理是。利用PCR技术扩增，若将一个目的基因复制10次，则需要在缓冲液中至少加入个引物。
（3）目的基因进入受体细胞内，并在受体细胞内维持稳定和表达的过程称为。科研人员通过实验研究发现培育的该转基因植株的光合作用速率并未明显增大，可能的原因是。
（4）另有一些科学家利用生物技术将人的生长激素基因导入小鼠受精卵的细胞核中，经培育获得一种转基因小鼠，其膀胱上皮细胞可以合成人的生长激素并分泌到尿液中。有关叙述错误的是。
A．选择受精卵作为外源基因的受体细胞是因为这种细胞的全能性最容易表达
B．采用DNA分子杂交技术可检测外源基因在小鼠细胞内是否成功表达
C．人的生长激素基因能在小鼠细胞表达，说明遗传密码在不同种生物中可以通用
D．将转基因小鼠体细胞进行核移植（克隆），可以获得多个具有外源基因的后代发布：2025/1/16 8:0:1组卷：14引用：2难度：0.6 -
3．下列关于DNA片段扩增及其鉴定的说法错误的是（ ）
发布：2024/12/30 23:30:2组卷：3引用：3难度：0.7
