长期高血糖可引发血管细胞衰老。科研人员为研究S蛋白在因高血糖引发的血管细胞衰老中的作用，以腺病毒为载体将编码S蛋白的S基因导入血管细胞，实现S蛋白在血管细胞中的大量表达。
（1）腺病毒的遗传物质为DNA，其复制需要E1、E2、E3基因共同完成。为将S基因导入腺病毒，科研人员首先构建了含S基因的重组质粒，过程如图1所示。
①科研人员将S基因用 BamHIBamHI和 EcoRIEcoRI酶切后，用DNA连接酶连入质粒Ⅰ，得到重组质粒Ⅰ（图1甲所示），导入用CaCl2处理制备的细菌。用添加抗生素的培养基筛选，对所长出的单菌落提取质粒，通过 设计S基因特异的引物进行PCR设计S基因特异的引物进行PCR的方法可鉴定重组质粒Ⅰ是否插入了S基因。
②用PmeⅠ酶切重组质粒Ⅰ获得DNA片段。将此DNA片段与质粒Ⅱ（图1乙所示）共同转化BJ细菌。在BJ细菌体内某些酶的作用下，含同源序列的DNA片段（图1甲、乙所示的左臂、右臂）可以发生同源重组，产生重组质粒Ⅱ（图1丙所示）。使用添加 卡那霉素卡那霉素的培养基可筛选得到 成功导入重组质粒Ⅰ、Ⅱ成功导入重组质粒Ⅰ、Ⅱ的菌落。
（2）将含S基因的重组质粒Ⅱ，用 PacIPacI酶切后，获得改造后的腺病毒DNA。将其导入A细胞（A细胞含有E3基因，可表达E3蛋白），如图2所示。腺病毒DNA在A细胞内能够 复制并指导腺病毒外壳蛋白的合成复制并指导腺病毒外壳蛋白的合成，从而产生大量重组腺病毒，腺病毒进入宿主细胞后不整合到宿主细胞染色体上。
（3）综合上述信息，从生物安全性角度分析重组腺病毒载体的优点：重组腺病毒进入宿主细胞后不整合到宿主细胞染色体上；腺病毒是人工改造的载体，不含致病基因；重组腺病毒只能在A细胞中才能够复制，即使侵染其他细胞，也不能复制重组腺病毒进入宿主细胞后不整合到宿主细胞染色体上；腺病毒是人工改造的载体，不含致病基因；重组腺病毒只能在A细胞中才能够复制，即使侵染其他细胞，也不能复制。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】BamHI；EcoRI；设计S基因特异的引物进行PCR；卡那霉素；成功导入重组质粒Ⅰ、Ⅱ；PacI；复制并指导腺病毒外壳蛋白的合成；重组腺病毒进入宿主细胞后不整合到宿主细胞染色体上；腺病毒是人工改造的载体，不含致病基因；重组腺病毒只能在A细胞中才能够复制，即使侵染其他细胞，也不能复制
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：8引用：2难度：0.5
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1．下列有关基因工程技术和蛋白质工程技术叙述正确的是（ ）
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2．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
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