为评估外源基因Vgb在菊花中的稳定性以及对生态环境的影响，研究人员在种植转基因菊花的第二年，随机选取转基因菊花株系及周边非转基因菊花和各种杂草，提取DNA。根据Vgb设计特异性引物进行PCR扩增，电泳结果如图。回答下列问题：
（1）将外源基因Vgb整合到菊花细胞需要先构建基因表达载体，构建基因表达载体时，需要使用的酶有 限制酶和DNA连接酶限制酶和DNA连接酶。重组载体进入菊花细胞并在细胞内维持稳定和表达的过程称为 转化转化。构建基因表达载体时，外源基因Vgb插在启动子的上游，则在菊花细胞中检测不到表达产物，主要原因是 目的基因无法转录目的基因无法转录。
（2）设计引物是PCR技术的关键步骤之一、根据Vgb设计特异性引物进行PCR扩增，某同学设计的一组引物（只标注了部分碱基序列）为
，此引物设计 不合理不合理（填“合理”或“不合理”），说明理由：引物Ⅰ和引物Ⅱ会因局部发生碱基互补配对而失效引物Ⅰ和引物Ⅱ会因局部发生碱基互补配对而失效。
（3）设置空白对照的目的是 排除实验操作、试剂污染等对结果的影响排除实验操作、试剂污染等对结果的影响。对于外源基因Vgb在菊花中的稳定性以及对周边植物的影响方面，图中实验结果表明 2年内Vgb基因在菊花细胞中稳定存在，且未发生向周边植物的扩散2年内Vgb基因在菊花细胞中稳定存在，且未发生向周边植物的扩散。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】限制酶和DNA连接酶；转化；目的基因无法转录；不合理；引物Ⅰ和引物Ⅱ会因局部发生碱基互补配对而失效；排除实验操作、试剂污染等对结果的影响；2年内Vgb基因在菊花细胞中稳定存在，且未发生向周边植物的扩散
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：28引用：4难度：0.6
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2．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6 -
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