基因敲除又称基因打靶，该技术通过外源DNA与染色体DNA之间的同源重组，进行精确的定点修饰和基因改造，具有专一性强、染色体DNA可与目的片段共同稳定遗传等特点。可用于基因功能的研究和单基因遗传病的治疗。为研究小鼠细胞中基因X的功能，科学家通过同源重组法将小鼠胚胎干细胞中的基因X的活性消除并获得嵌合体小鼠。在制备置换载体时，将neor基因（抗新霉素基因）作为置换基因X的插入突变，同时在neor基因外侧添加HSV-tk基因，该基因的表达产物能将DHPG转化为有毒物质而使细胞死亡，如图甲所示。置换载体导入ES细胞后，可发生同源重组和非同源重组，如图乙所示。
（1）根据图甲可知，在构建基因X的置换载体时，需用相同的限制酶限制酶酶切割基因X和neor基因neor基因，该酶的切割位点应位于基因X的内部和neor基因的两端基因X的内部和neor基因的两端，用相同酶切的目的是产生相同的黏性末端，便于被DNA连接酶连接产生相同的黏性末端，便于被DNA连接酶连接。
（2）ES细胞在功能上具有的特征是发育的全能性发育的全能性，常用显微注射显微注射技术将置换载体导入ES细胞，将置换载体导入ES细胞后，如何将发生同源重组的ES细胞筛选出来？并简述理由。方法：在培养基中加入新霉素和DHPG，培养导入置换载体的细胞在培养基中加入新霉素和DHPG，培养导入置换载体的细胞；理由：未成功导入的ES细胞中不含neor基因，不抗新霉素，所以在培养基中无法存活。成功导入，但发生非同源重组的ES细胞中，HSK-tk基因可以表达，其产物会将培养基中的DHPG转化为有毒物质从而杀死ES细胞。只有发生同源重组的细胞，含有neor基因，同时无HSV-tk基因，可以在培养基中存活未成功导入的ES细胞中不含neor基因，不抗新霉素，所以在培养基中无法存活。成功导入，但发生非同源重组的ES细胞中，HSK-tk基因可以表达，其产物会将培养基中的DHPG转化为有毒物质从而杀死ES细胞。只有发生同源重组的细胞，含有neor基因，同时无HSV-tk基因，可以在培养基中存活。
（3）将嵌合体胚胎移植到受体小鼠并能在受体小鼠内存活的原因是：受体对外来胚胎基本上不发生免疫排斥反应受体对外来胚胎基本上不发生免疫排斥反应。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】限制酶；neor基因；基因X的内部和neor基因的两端；产生相同的黏性末端，便于被DNA连接酶连接；发育的全能性；显微注射；在培养基中加入新霉素和DHPG，培养导入置换载体的细胞；未成功导入的ES细胞中不含neor基因，不抗新霉素，所以在培养基中无法存活。成功导入，但发生非同源重组的ES细胞中，HSK-tk基因可以表达，其产物会将培养基中的DHPG转化为有毒物质从而杀死ES细胞。只有发生同源重组的细胞，含有neor基因，同时无HSV-tk基因，可以在培养基中存活；受体对外来胚胎基本上不发生免疫排斥反应
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：28引用：1难度：0.6
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2．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
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