大肠杆菌pUC18质粒是基因工程中常用的运载体。某限制酶在此质粒上的唯一酶切位点位于LacZ基因中，如果没有插入外源基因，LacZ基因便可表达出口一半乳糖苷酶。当培养基中含有IPTG和X-gal时，X-gal便会被β一半乳糖苷酶水解成蓝色，大肠杆菌将形成蓝色菌落。反之，则形成白色菌落。下图表示利用此质粒实施基因工程的主要流程。
请分析并回答：
（1）已获得的目的基因可利用 PCRPCR技术进行扩增。
（2）目的基因插入质粒构建重组质粒的过程中，需要DNA连接酶恢复 磷酸二酯磷酸二酯键。
（3）将试管I中的物质和大肠杆菌共同置于试管Ⅱ的目的是 进行转化进行转化；大肠杆菌需事先用Ca2+进行处理，目的是 使大肠杆菌细胞处于感受态使大肠杆菌细胞处于感受态。
（4）将试管Ⅱ中的菌液接种于选择培养基上培养，培养基中应含有大肠杆菌必需的营养物质包括 碳源、氮源、无机盐、水碳源、氮源、无机盐、水和生长因子，还应加入IPTG、X-gal以及氨苄青霉素，其中加入氨苄青霉素的作用是筛选出 导入pUC18质粒的大肠杆菌导入pUC18质粒的大肠杆菌。
（5）若观察到培养基上出现 白白色菌落，则说明大肠杆菌中已成功导入了重组质粒。如果作为受体细胞的大肠杆菌也含有LacZ基因，则不利于重组质粒的筛选，原因是 无论大肠杆菌是否导入重组质粒，均会呈现蓝色菌落无论大肠杆菌是否导入重组质粒，均会呈现蓝色菌落。
【考点】基因工程的操作过程综合；微生物的选择培养和计数．
【答案】PCR；磷酸二酯；进行转化；使大肠杆菌细胞处于感受态；碳源、氮源、无机盐、水；导入pUC18质粒的大肠杆菌；白；无论大肠杆菌是否导入重组质粒，均会呈现蓝色菌落
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：79引用：11难度：0.5
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（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
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