黄萎病是危害棉花种植的常见疾病，科学家通过基因工程技术将抗黄萎病基因--葡萄糖氧化酶基因（GO）导入棉花，获得抗黄萎病棉花。已知T-DNA上的基因在农杆菌中不表达，在植物细胞中可以表达，请将转基因棉花培育步骤补充完整：
（1）构建图片所示重组Ti质粒，用CaCl2CaCl2处理农杆菌，使重组Ti质粒进入农杆菌中，将农杆菌接种到含卡那霉素卡那霉素的LB液体培养基中振荡培养。培养适宜时间后，离心，去除上清液，加入适量MS液体培养基，可通过测定菌液在600nm波长处的OD值来确定农杆菌密度是否适宜。
（2）切取经卡那霉素卡那霉素培养的棉花幼苗的下胚轴，直接转入菌液中侵染5-10min后，倒出菌液，用灭菌滤纸吸取下胚轴表面多余菌液，将下胚轴放入愈伤组织诱导培养基中培养2天。2天后，向培养基中加入适量草丁膦草丁膦和青霉素，其目的是筛选出转化成功的棉花细胞和抑制农杆菌生长抑制农杆菌生长。
（3）将所得愈伤组织接种到适宜培养基中培养，诱导形成胚状体，在适宜人工条件下继续发育成棉花幼苗。利用抗原-抗体分子杂交抗原-抗体分子杂交技术检测棉花细胞是否合成葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶，选出抗黄萎病棉花。通过病原体感染实验病原体感染实验可以从个体水平上鉴定该棉花对黄萎病。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】CaCl2；卡那霉素；卡那霉素；草丁膦；抑制农杆菌生长；抗原-抗体分子杂交；葡萄糖氧化酶；病原体感染实验
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：6引用：1难度：0.7
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3．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6
