M基因编码的M蛋白在动物A的肝细胞中特异性表达。现设计实验，将外源DNA片段F插入M基因的特定位置，再通过特定生物学技术获得M基因失活的转基因克隆动物A，流程如图所示。回答下列问题：
（1）在构建含有片段F的重组质粒过程中，切割质粒DNA的工具酶能将特定部位的两个核苷酸之间的 磷酸二酯键磷酸二酯键断开。
（2）在无菌、无毒等适宜环境中进行动物A成纤维细胞的原代和传代培养时，都要用到胰蛋白酶，作用分别是 将组织分散成细胞将组织分散成细胞、使细胞从瓶壁上脱落使细胞从瓶壁上脱落。培养过程中，需要定期更换培养液，目的有 清除代谢物（，防止对细胞造成危害）清除代谢物（，防止对细胞造成危害）、给细胞补充营养给细胞补充营养。
（3）与胚胎细胞核移植技术相比，体细胞核移植技术的成功率更低，原因是 体细胞分化程度高，恢复全能性困难体细胞分化程度高，恢复全能性困难。从早期胚胎中分离获得的胚胎干细胞，功能上具有全能性全能性。
（4）鉴定转基因动物：以免疫小鼠的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞进行融合，筛选融合杂种细胞，制备M蛋白的 单克隆抗体单克隆抗体。简要写出利用其确定克隆动物A中M基因是否失活的实验思路：分别提取动物A和克隆动物A的肝组织蛋白质，进行抗原——抗体杂交分别提取动物A和克隆动物A的肝组织蛋白质，进行抗原——抗体杂交。
（5）获得克隆动物A时，除了转基因技术，还涉及的生物学技术有 动物细胞培养、核移植、胚胎移植动物细胞培养、核移植、胚胎移植。
【答案】磷酸二酯键；将组织分散成细胞；使细胞从瓶壁上脱落；清除代谢物（，防止对细胞造成危害）；给细胞补充营养；体细胞分化程度高，恢复全能性困难；全能性；单克隆抗体；分别提取动物A和克隆动物A的肝组织蛋白质，进行抗原——抗体杂交；动物细胞培养、核移植、胚胎移植
【解答】
【点评】
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