人乳铁蛋白（hLF）对细菌、真菌和病毒等都有抑制作用。研究人员开展人乳铁蛋白基因乳腺特异性表达载体构建及转染研究，主要流程如下图。图中AseⅠ、NheⅠ、SalⅠ、BamHⅠ代表相关限制酶切点，neor为新霉素抗性基因，BLG基因为B乳球蛋白基因，GFP基因为绿色荧光蛋白基因。请回答下列问题。
（1）过程①中，不能从人肌肉细胞中提取RNA用于RT-PCR，是因为 hLF基因在人肌肉细胞中不转录（表达）hLF基因在人肌肉细胞中不转录（表达）。荧光RT﹣PCR技术所用的试剂盒中通常都应该含有 逆（反）转录酶逆（反）转录酶、Taq酶、荧光标记的核酸探针、引物、dNTP、缓冲体系。
（2）在RT-PCR过程中，加入的引物需在 5'5'端添加 SalⅠ和BamHⅠSalⅠ和BamHⅠ两种限制酶的识别序列，便于hLF基因插入pEB中。利用RT-PCR技术获取的目的基因 能能（填“能”或“不能”）在物种之间交流；该技术还可用于对某些微量RNA病毒的检测，可提高检测的灵敏度，原因是 增加了待测RNA逆转录产生的DNA的数量（或浓度），便于检测增加了待测RNA逆转录产生的DNA的数量（或浓度），便于检测。若利用PCR技术扩增某基因片段时消耗了126个引物分子，则该过程扩增了 66次。
（3）过程②中，hLF基因插入到BLG基因之后的目的是 使人乳铁蛋白基因在山羊的乳腺细胞中表达（或使目的基因表达）使人乳铁蛋白基因在山羊的乳腺细胞中表达（或使目的基因表达）；该过程中，两个基因共用的调控元件是BLG基因的 启动子启动子。
（4）PEBL质粒导入受体细胞的方法是 脂质体介导脂质体介导，依据的主要原理是 生物膜具有一定的流动性生物膜具有一定的流动性。
（5）将转染后的山羊乳腺上皮细胞先置于含新霉素的培养液中培养，再利用荧光显微镜观察山羊乳腺上皮细胞中 是否有绿色荧光是否有绿色荧光，以筛选出转染成功的细胞。该过程 不能不能（填“能”或“不能”）区分普通质粒或重组质粒，接下来还可采用 分子杂交分子杂交技术检验基因是否成功转录。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】hLF基因在人肌肉细胞中不转录（表达）；逆（反）转录酶；5'；SalⅠ和BamHⅠ；能；增加了待测RNA逆转录产生的DNA的数量（或浓度），便于检测；6；使人乳铁蛋白基因在山羊的乳腺细胞中表达（或使目的基因表达）；启动子；脂质体介导；生物膜具有一定的流动性；是否有绿色荧光；不能；分子杂交
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：8引用：2难度：0.6
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2．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6 -
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