四尾栅藻生长周期短、适应性强，是一种高潜力生物柴油新型原料，但油脂产量低。研究人员从含油量高的紫苏中提取DGAT1（催化油脂合成的关键酶）基因，并成功导入到四尾栅藻细胞内，获得转基因的产油四尾栅藻。其制备流程如图所示，图中Ampr表示氨苄青霉素抗性基因，LacZ基因可使细菌利用培养基中的物质X-gal进而使菌落呈现蓝色，无该基因或该基因被破坏，菌落呈白色。请分析回答下列问题：
（1）从高表达的紫苏组织细胞中提取总的RNA，在 逆转录逆转录酶作用下获得cDNA，用于PCR扩增。该过程获得cDNA的原理是 以mRNA为模板按照碱基互补配对原则合成cDNA以mRNA为模板按照碱基互补配对原则合成cDNA。
（2）PCR扩增DGATI基因时，使反应体系中的模板cDNA解旋为单链的条件是 加热至90～95℃加热至90～95℃。在DNA延伸的过程中，使用Taq酶而不使用大肠杆菌DNA聚合酶的主要原因是 Taq酶热稳定性高而大肠杆菌DNA聚合酶在高温下失活Taq酶热稳定性高而大肠杆菌DNA聚合酶在高温下失活。
（3）构建的pMD19-DGAT1导入到经 CaCl2CaCl2溶液处理的感受态大肠杆菌细胞中，并接种到含 X-gal和氨苄青霉素X-gal和氨苄青霉素的培养基中培养。一段时间后，挑选 白白色的菌落以提取质粒pMD19-DGAT1。
（4）用限制酶BamHⅠ和XbaⅠ切割pMD19-DGAT1和pBI121，将其连接成重组表达载体pBI121-DGAT1，并将其导入四尾栅藻细胞中。与单酶切相比，双酶切的优点是 使DGAT1基因能定向插入表达载体，减少自身环化使DGAT1基因能定向插入表达载体，减少自身环化。
【考点】基因工程的操作过程综合；DNA片段的扩增与电泳鉴定．
【答案】逆转录；以mRNA为模板按照碱基互补配对原则合成cDNA；加热至90～95℃；Taq酶热稳定性高而大肠杆菌DNA聚合酶在高温下失活；CaCl2；X-gal和氨苄青霉素；白；使DGAT1基因能定向插入表达载体，减少自身环化
【解答】
【点评】
声明：本试题解析著作权属菁优网所有，未经书面同意，不得复制发布。
发布：2024/6/27 10:35:59组卷：1引用：2难度：0.7
相似题
-
1．下列有关基因工程技术和蛋白质工程技术叙述正确的是（ ）
发布：2025/1/5 8:0:1组卷：6引用：1难度：0.7 -
2．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6 -
3．下列有关基因工程的叙述，正确的是（ ）
发布：2024/12/31 5:0:5组卷：3引用：2难度：0.7
