小立碗藓是具有高效同源重组率的苔藓植物，科学家利用同源重组交换的原理对小立碗藓进行基因敲除来研究某目的基因的功能。基因敲除过程是先构建基因敲除载体，将基因敲除载体导入受体细胞，经过筛选找出基因敲除成功的植株。基因敲除原理如图所示：
注：抗生素抗性基因表达产物对卡那霉素有抗性；1、2为实现同源重组交换的序列，3、4、5、6为其他不同的基因片段；G-up-f、G-down-r、35sp-r、35st-f、Gene-f、Gene-r为引物；1、2序列发生同源重组，使得野生型小立碗藓DNA上的目的基因被抗生素抗性基因替换。
（1）小立碗藓目的基因敲除载体的受体细胞是原生质体。要制备小立碗藓的原生质体，常用的酶是 纤维素酶和果胶酶纤维素酶和果胶酶。制备原生质体时，两种酶应该溶解在 等于等于（填“大于”“小于”或“等于”）细胞液浓度的外界溶液中，原因是 若浓度过低原生质体会吸水涨破，若浓度过高则会失水皱缩若浓度过低原生质体会吸水涨破，若浓度过高则会失水皱缩。将构建好的目的基因敲除载体导入原生质体，然后将原生质体放在含 卡那霉素卡那霉素的培养基上培养，对能存活的植物提取基因组DNA，用引物 Gene-f、Gene-rGene-f、Gene-r进行PCR扩增30个循环后进行电泳，如果没有目的基因条带，则确定目的基因敲除成功。
（2）若1，2序列特异性差，则目的基因敲除载体可能会与非目的基因序列发生同源重组，造成目的基因敲除失败。若用G-up-f、G-down-r进行扩增，不能不能（填“能”或“不能”）确定野生型小立碗藓DNA上的目的基因是否被抗生素抗性基因替换，原因是 无论野生型小立碗藓DNA上的目的基因是否被抗生素抗性基因替换，扩增的结果都有条带无论野生型小立碗藓DNA上的目的基因是否被抗生素抗性基因替换，扩增的结果都有条带。
（3）动物减数分裂过程中，可能发生类似上述抗生素抗性基因替换目的基因的过程，具体时期是在 减数分裂Ⅰ前期（或四分体时期）减数分裂Ⅰ前期（或四分体时期）。
【考点】DNA片段的扩增与电泳鉴定；基因工程的操作过程综合．
【答案】纤维素酶和果胶酶；等于；若浓度过低原生质体会吸水涨破，若浓度过高则会失水皱缩；卡那霉素；Gene-f、Gene-r；不能；无论野生型小立碗藓DNA上的目的基因是否被抗生素抗性基因替换，扩增的结果都有条带；减数分裂Ⅰ前期（或四分体时期）
【解答】
【点评】
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发布：2024/4/20 14:35:0组卷：8引用：1难度：0.6
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1．数字PCR技术是一种核酸分子绝对定量技术，其原理如图所示。下列有关叙述正确的是（ ）
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2．科学家为了提高光合作用过程中Rubiaco酶对CO2的亲和力，利用PCR定点突变技术改造Rubisco酶基因，从而显著提高了植物的光合作用速率。请回答下列问题：
（1）PCR定点突变技术属于（填“基因工程”或“蛋白质工程”）。可利用定点突变的DNA构建基因表达载体，常用将基因表达载体导入植物细胞，还需用到植物细胞工程中的技术，才能最终获得转基因植物。
（2）PCR过程所依据的原理是。利用PCR技术扩增，若将一个目的基因复制10次，则需要在缓冲液中至少加入个引物。
（3）目的基因进入受体细胞内，并在受体细胞内维持稳定和表达的过程称为。科研人员通过实验研究发现培育的该转基因植株的光合作用速率并未明显增大，可能的原因是。
（4）另有一些科学家利用生物技术将人的生长激素基因导入小鼠受精卵的细胞核中，经培育获得一种转基因小鼠，其膀胱上皮细胞可以合成人的生长激素并分泌到尿液中。有关叙述错误的是。
A．选择受精卵作为外源基因的受体细胞是因为这种细胞的全能性最容易表达
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D．将转基因小鼠体细胞进行核移植（克隆），可以获得多个具有外源基因的后代发布：2025/1/16 8:0:1组卷：14引用：2难度：0.6 -
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