农杆菌是一种在土壤中生活的微生物，能在自然条件下侵染双子叶植物和裸子植物，而对大多数单子叶植物没有侵染能力。植物基因工程中常用含有重组Ti质粒的农杆菌和受体植物细胞的愈伤组织共培养，进行转基因操作。现有一段抗除草剂基因编码蛋白质的区域在克隆载体上，要将其转入棉花细胞，得到抗除草剂的转基因棉花。
（1）在构建基因表达载体的过程中，要先用 限制酶限制酶对 目的基因目的基因和 运载体运载体进行切割，之后用 DNA连接DNA连接酶连接形成重组质粒。该过程中为保证目的基因以正确的方向与Ti质粒进行连接，科学家使用 22（填“1”或“2”）种限制酶。
（2）在以上重组质粒中，目的基因和抗卡那霉素抗性基因，都应该位于 T-DNAT-DNA片段内，因为 Ti质粒上只有T-DNA片段能够整合到受体细胞的染色体DNA上Ti质粒上只有T-DNA片段能够整合到受体细胞的染色体DNA上。
（3）将重组的Ti质粒转入农杆菌可用 Ca2+Ca2+处理。得到的农杆菌菌液和棉花细胞愈伤组织共培养一段时间后，将愈伤组织置于含有 卡那霉素卡那霉素和除草剂的选择培养基上进行组织培养，通过调整 生长素和细胞分裂素的比例生长素和细胞分裂素的比例，使其脱分化、再分化形成转基因植株群体。
（4）除上述方法获得抗除草剂的棉花，用物理或化学方法对大量正常棉花的 愈伤组织愈伤组织进行诱变处理，最终发现仅一株烟草（P）抗除草剂但同时花粉败育。为保留抗除草剂特性，最快能在 F1F1（填“F1”或“F2”）中能获得抗除草剂纯合子植株。
【考点】植物的组织培养．
【答案】限制酶；目的基因；运载体；DNA连接；2；T-DNA；Ti质粒上只有T-DNA片段能够整合到受体细胞的染色体DNA上；Ca2+；卡那霉素；生长素和细胞分裂素的比例；愈伤组织；F1
【解答】
【点评】
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发布：2024/4/20 14:35:0组卷：5引用：2难度：0.6
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