IKK激酶由IKKα、IKKβ和IKKγ三种亚基组成，该酶参与动物体内免疫细胞的分化。临床上发现某重症联合免疫缺陷（SCID）患儿IKKB基因编码区第1183位碱基T突变为C，导致IKKβ上第395位酪氨酸被组氨酸代替。为研究该患儿发病机制，研究人员应用大引物PCR 定点诱变技术培育出SCID模型小鼠，主要过程如图1、2。分析回答：

过程	实验目的	步骤要点
导入	a.处理突变基因与载体
	b.构建重组载体	利用DNA连接酶催化突变基因和载体连接
	e.导入目的基因	利用显微注射法将重组载体注入小鼠受精卵 利用显微注射法将重组载体注入小鼠受精卵
发育	d.获取早期胚胎	利用专用培养液培养受精卵，并检测其发育状况
	e.代孕获得小鼠	利用合适的早期胚胎进行胚胎移植 利用合适的早期胚胎进行胚胎移植
	f.鉴定、薄选F0小鼠	利用PCR鉴定基因，筛选出杂合鼠F0

（1）在图1获取突变基因过程中，需要以下3种引物：
引物A：5'-CCCCAACGGAAAGTGTCA-3'（下划线字母为突变碱基）
引物B：5'-TAAGCTTCGAACATCCTA-3'（下划线部分为限制酶HindⅢ识别序列）
引物C：5'-GTGAGCTCGCTGCCCCAA-3′（下划线部分为限制酶SacⅠ识别序列）
则PCR₁中使用的引物有

引物A和引物C

引物A和引物C

，PCR₂中使用的引物有

引物B

引物B

和图中大引物的

②

②

（①/②）链。
（2）在PCR反应体系中，需要加入引物和IKKB基因外，还需要加入

Taq酶（耐高温DNA聚合酶）、4种脱氧核苷酸、缓冲液、Mg²⁺

Taq酶（耐高温DNA聚合酶）、4种脱氧核苷酸、缓冲液、Mg²⁺

 等。PCR中尽可能提高退火温度以减少

非目标基因的获得

非目标基因的获得

。
（3）图2模型鼠培育过程中杂合模型鼠（F₀）的培育涉及了一系列现代生物技术，如表是其中的一些步骤，请根据题意完成表格内容。
（4）根据图2杂交结果，可以确认突变基因已经较稳定地整合到小鼠细胞的

核DNA（染色体）

核DNA（染色体）

上，在遗传时遵循

基因分离

基因分离

定律。研究人员对三种基因型小鼠胸腺淋巴细胞中组成IKK激酶的三种亚基进行提纯和电泳，结果如图3。请依据此结果提出SCID患者免疫缺陷产生的机制：

IKKB基因突变导致IKKβ含量减少，IKK激酶活力降低，T细胞减少

IKKB基因突变导致IKKβ含量减少，IKK激酶活力降低，T细胞减少

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