抗除草剂转基因作物的推广可有效减轻除草劳动强度、提高农业生产效率。图1为抗除草剂转基因玉米的技术流程。
（1）构建含除草剂抗性基因的表达载体，传统的方法是目的基因通过 限制酶、DNA连接限制酶、DNA连接酶与载体进行重组。另外，可通过 PCRPCR技术在目的基因两侧添加相应限制酶识别序列，以便构建表达载体。
（2）科研人员研发了新的DNA重组方法——无缝克隆In-Fusion技术，如图2所示。In-Fusion酶能够识别任何具有相同15bp末端序列的线性DNA分子并使其形成黏性末端，据此实现目的基因和载体的连接。和传统方法比，无缝克隆In-Fusion技术的优点是 插入位点不受限制酶识别序列限制，实现了目的基因在载体任意位点上的插入插入位点不受限制酶识别序列限制，实现了目的基因在载体任意位点上的插入。
①应用以上方法构建含有A基因和GUS基因的重组DNA分子时，首先获得了图3中的3种DNA分子，然后混合进行In-Fusion反应。
如果引物2上额外添加的片段与GUS基因e片段（图中加粗表示）序列相同，那么引物1和引物4上额外增加的片段分别与载体中的片段（图中加粗表示） a（d）a（d）、d（a）d（a）相同。完成重组反应后，将表达载体导入农杆菌中。
②为筛选成功转入目标重组DNA分子的菌落，可以选取引物 1、41、4扩增目的基因并电泳检测。
（3）农杆菌转化愈伤组织时，常用含除草剂的选择培养基筛选转化的愈伤组织。由于愈伤组织表面常残留农杆菌，导致未成功转化的愈伤组织也可能在选择培养基上生长。针对上述现象，可以在选择培养基中同时加入 无色物质K无色物质K进行筛选，其中周围的培养基 显显（填“显”或“不显”）蓝色的愈伤组织是转化成功的，原因是 转化成功的愈伤组织中，GUS基因正确表达，表达产物能催化培养基中的无色物质K呈现蓝色；农杆菌中的GUS由于含有内含子转录序列不能切除，不能正确表达，不能催化培养基中的无色物质K呈现蓝色转化成功的愈伤组织中，GUS基因正确表达，表达产物能催化培养基中的无色物质K呈现蓝色；农杆菌中的GUS由于含有内含子转录序列不能切除，不能正确表达，不能催化培养基中的无色物质K呈现蓝色。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】限制酶、DNA连接；PCR；插入位点不受限制酶识别序列限制，实现了目的基因在载体任意位点上的插入；a（d）；d（a）；1、4；无色物质K；显；转化成功的愈伤组织中，GUS基因正确表达，表达产物能催化培养基中的无色物质K呈现蓝色；农杆菌中的GUS由于含有内含子转录序列不能切除，不能正确表达，不能催化培养基中的无色物质K呈现蓝色
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/29 8:0:10组卷：35引用：4难度：0.6
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2．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
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