现代生物技术。
吡哆醛激酶（PLK）是维生素B₆的关键代谢酶，某研究团队构建了含家蚕PLK基因的重组质粒，导入大肠杆菌诱导表达，对所得的产物进行分离纯化。
重组质粒的构建选用了pET-22b（+）质粒，图1为该质粒一条链的部分序列。各限制酶的识别序列、DNA序列所对应的氨基酸序列均已在图中标注。

（1）DNA分子中与mRNA序列一致的链称为编码链，与mRNA序列互补的链称为模板链。氨基酸Met的密码子是AUG，由此可知图1所示为

编码链

编码链

（编码链/模板链）。
（2）该团队将家蚕PLK基因作为目的基因（图2），两端的序列已于图中标注。为了将图2所示目的基因插入图1所示的质粒序列，应选用的限制酶是

B

B

。
A.NdeⅠ和HindⅢ
B.NdeⅠ和XhoⅠ
C.SalⅠ和HindⅢ
D.SalⅠ和XhoⅠ
（3）pET-22b（+）质粒含有氨苄青霉素的抗性基因，该质粒的pelB leader序列可将表达的目的蛋白分泌到细胞外。若按照第（2）题所选的限制酶进行预定操作，下列分析正确的是

BD

BD

。（多选）
A.应选用具有氨苄青霉素抗性的大肠杆菌作为受体菌
B.应选用不具有氨苄青霉素抗性的大肠杆菌作为受体菌
C.大肠杆菌所表达的目的蛋白会被分泌到细胞外
D.大肠杆菌所表达的目的蛋白不会被分泌到细胞外
（4）通过上述方法在大肠杆菌中表达出的吡哆醛激酶，其肽链在羧基端有连续6个氨基酸His（His•Tag），可利用His•Tag与Ni²⁺之间的亲和层析加以纯化。此步操作应于何时进行

C

C

。
A.破碎细菌后，过滤前
B.过滤后，加入硫酸铵前
C.加入硫酸铵后，冷冻结晶前
D.冷冻结晶后
（5）若以上述工艺流程大规模生产吡哆醛激酶，涉及生物工程的领域有

ACD

ACD

。（多选）
A.基因工程
B.细胞工程
C.发酵工程
D.酶工程