新型冠状病毒是一种带包膜的RNA病毒，膜表面的刺突蛋白（S蛋白）与宿主细胞膜表面受体ACE2结合，介导病毒进入宿主细胞。进一步研究发现，RBD是S蛋白中负责和受体ACE2结合的关键蛋白。基于以上研究某科研团队研发了一种重组新冠病毒疫苗（也叫重组亚单位疫苗），制备过程如下，回答下列问题。

（1）该疫苗的制备过程中，涉及的现代生物技术有

基因工程、动物细胞培养、蛋白质的分离提纯

基因工程、动物细胞培养、蛋白质的分离提纯

。（答出两个即可）
（2）逆转录获得的RBD蛋白基因不含有限制酶识别序列，这就需要在对目的基因进行PCR扩增时，在设计的目的基因引物的一端加装限制酶的识别序列，应加在引物的

5'

5'

端（填“3'”或“5'”），为了避免目的基因自身环化，最好在两种引物的一端加装

不同

不同

（填“相同”或“不同”）限制酶的识别序列。
（3）使RBD蛋白基因在受体细胞中表达，需要借助载体而不能直接将目的基因导入受体细胞，原因是

目的基因无复制原点、无表达所需启动子等，直接导入受体细胞不能表达

目的基因无复制原点、无表达所需启动子等，直接导入受体细胞不能表达

（答出两点即可）。
（4）体外培养CHO细胞时，需要提供无菌、无毒的环境，即对

培养液和培养用具

培养液和培养用具

进行无菌处理。培养过程中还要定期更换培养液，其目的是

清除代谢产物，防止对细胞造成危害

清除代谢产物，防止对细胞造成危害

。
（5）为了确定目的基因是否表达，应从受体细胞中提取

RBD蛋白

RBD蛋白

（填“RBD蛋白”或“所有蛋白质”）来检测。