为探究Bcl-2相关抗凋亡蛋白3（BAG3）在细胞自噬中的作用，科研人员计划从质粒A中获取BAG3基因，将其接入质粒pGEX-4T1，然后在宿主细胞内表达目标蛋白，用于后续研究。请回答下列问题：
（1）BAG3的基因序列如图2所示。由于BAC3基因两侧没有合适的酶切位点，并确定内部不含有EcoRI、XhoI限制酶的识别序列。在设计引物时，需将引物与限制酶的识别序列相连，以便将目的基因与载体相连。设计出的引物是 ADAD。
A．引物5'-TTGAATTCATGAGCGCCGCCACCCACTC-3'
B．引物5'-TTGAATTCTACTCGCGGCGGTGGGTGAG-3'
C．引物5'-TAGAGCTCCGGTGCTGCTGGGTTACCAC-3'
D．引物5'-TACTCGAGCGGTGCTGCTGGGTTACCAG-3'
（2）合成引物后，以 质粒A质粒A为模板进行PCR，为了确认是否扩增出了目的基因，可对扩增产物进行 电泳电泳，取出凝胶置于紫外灯下观察照相，与DNAmarker（标准参照物）进行对比，切下含目的基因片段的琼脂糖凝胶，通过试剂盒回收目的基因。
（3）用双酶切法分别处理回收的目的基因和pCEX-4TI质粒，为了提高目的基因与表达质粒的连接效率，需要排除 酶切后的非目标片段酶切后的非目标片段的干扰。
（4）用 Ca2+Ca2+处理大肠杆菌细胞，使其处于一种能 吸收周围环境中DNA分子吸收周围环境中DNA分子的生理状态，将构建好的重组质粒导入其中。为了筛选出工程菌，以便后期提取质粒，检测是否含有目的基因片段，请写出工程菌的纯培养过程。 在含有氨苄青霉素的固体培养基上培养，挑取单菌落接种到液体培养基中扩增培养在含有氨苄青霉素的固体培养基上培养，挑取单菌落接种到液体培养基中扩增培养。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】AD；质粒A；电泳；酶切后的非目标片段；Ca2+；吸收周围环境中DNA分子；在含有氨苄青霉素的固体培养基上培养，挑取单菌落接种到液体培养基中扩增培养
【解答】
【点评】
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发布：2024/7/7 8:0:9组卷：38引用：5难度：0.6
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1．下列有关基因工程技术和蛋白质工程技术叙述正确的是（ ）
发布：2025/1/5 8:0:1组卷：6引用：1难度：0.7 -
2．下列有关基因工程的叙述，正确的是（ ）
发布：2024/12/31 5:0:5组卷：3引用：2难度：0.7 -
3．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6
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