酵母双杂交技术是筛选能与已知蛋白互作的蛋白质的方法，其主要原理如图1。黄瓜花叶病毒（CMV）可侵染200多种植物，病毒的外壳蛋白（CMVCP）直接参与病毒的细胞间转移、症状表现等。研究人员利用酵母双杂交技术，从CMV感染的番茄叶片cDNA文库中筛选出CMVCP互作蛋白基因，图2为构建CMVCP诱饵载体（能表达出BD-CP融合蛋白）的流程。请据图回答下列问题。
（1）图1中，获得BD-X蛋白的关键是将相应序列连接形成融合基因，融合基因获得过程属于 基因突变基因突变（变异类型）。X与Y的结合能使转录因子的BD和AD同时结合到启动子上，进而招募酶x催化LacZ基因的转录，酶X是 RNA聚合酶RNA聚合酶。
（2）图2中，过程①提取总RNA时选择有明显感染症状叶片的原因是 症状明显叶片细胞中含有大量CMV病毒，有丰富的CP基因症状明显叶片细胞中含有大量CMV病毒，有丰富的CP基因。过程②中通常利用RT-PCR技术获得cDNA，上述技术中不同循环次数的扩增产物电泳结果如图3，则最适宜的循环次数是 1818次，依据是 2号条带比1号条带宽，而3号条带较弥散（或2号条带明亮、整齐）2号条带比1号条带宽，而3号条带较弥散（或2号条带明亮、整齐）。
（3）图2过程③构建诱饵载体时，为保证CPcDNA能定向插入到指定位置，需要在过程②设计PCR引物时，在两种引物的5'端分别添加BamH I和EcoR I识别序列在两种引物的5'端分别添加BamH I和EcoR I识别序列。用获得的诱饵载体先转化大肠杆菌，再用 稀释涂布平板稀释涂布平板法将菌液接种到含 卡那霉素卡那霉素的选择培养基上，挑取阳性单菌落细胞进行测序，确认插入的基因序列正确。
（4）获得CMVCP诱饵载体转化的酵母菌后，研究人员进一步开展CMVCP互作蛋白的筛选研究，其主要实验流程是：构建感染CMV的番茄cDNA文库→构建一系列靶蛋白载体→分别将靶蛋白载体导入诱饵载体转化后酵母分别将靶蛋白载体导入诱饵载体转化后酵母→接种培养，获取呈 蓝蓝色的菌落细胞→筛选、鉴定互作蛋白。
【考点】基因工程的操作过程综合；DNA片段的扩增与电泳鉴定．
【答案】基因突变；RNA聚合酶；症状明显叶片细胞中含有大量CMV病毒，有丰富的CP基因；18；2号条带比1号条带宽，而3号条带较弥散（或2号条带明亮、整齐）；在两种引物的5'端分别添加BamH I和EcoR I识别序列；稀释涂布平板；卡那霉素；分别将靶蛋白载体导入诱饵载体转化后酵母；蓝
【解答】
【点评】
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发布：2024/4/20 14:35:0组卷：30引用：1难度：0.5
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1．下列有关基因工程技术和蛋白质工程技术叙述正确的是（ ）
发布：2025/1/5 8:0:1组卷：6引用：1难度：0.7 -
2．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6 -
3．下列有关基因工程的叙述，正确的是（ ）
发布：2024/12/31 5:0:5组卷：3引用：2难度：0.7
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