凝乳酶是奶酪生产中的关键性酶。直接利用动、植物生产凝乳酶受多种因素限制，培育高酶活力凝乳酶微生物菌种是目前最有前途的发展方向。从牛胃液中分离到的凝乳酶以催化能力强而被广泛应用，研究人员运用基因工程技术，将编码该酶的基因转移到了微生物细胞中。
（1）从牛胃细胞中提取 mRNAmRNA，再逆转录形成cDNA，以此cDNA为模板PCR扩增目的基因，有时需要在引物的5′端设计 限制酶限制酶（填“限制酶”“DNA连接酶”或“RNA聚合酶”）识别序列，以便构建重组DNA分子。
（2）构建重组DNA分子（如图1所示）最好选用 BamHⅠ和 PstⅠBamHⅠ和 PstⅠ限制酶，理由是 在不破坏目的基因的基础上，双酶切割可使质粒和目的基因形成相同的黏性末端，防止错连在不破坏目的基因的基础上，双酶切割可使质粒和目的基因形成相同的黏性末端，防止错连。
若研究人员获得了甲、乙、丙三种含有目的基因的重组质粒，如图2所示。这三种重组质粒中，不能在宿主细胞中表达目的基因产物的有 甲和丙甲和丙，不能表达的原因是 甲中目的基因插入在启动子的上游，丙中目的基因插入在终止子的下游（甲、丙中目的基因不在启动子和终止子之间），两者目的基因均不能转录甲中目的基因插入在启动子的上游，丙中目的基因插入在终止子的下游（甲、丙中目的基因不在启动子和终止子之间），两者目的基因均不能转录。
（3）工业化生产过程中，最初多采用重组大肠杆菌或芽孢杆菌生产凝乳酶，现多采用重组毛霉生产，相较于大肠杆菌，毛霉作为受体细胞的优势是 含有内质网和高尔基体，可对蛋白质进行加工和修饰含有内质网和高尔基体，可对蛋白质进行加工和修饰。
（4）研究发现，如果将该凝乳酶的第20位和第24位氨基酸改变为半胱氨酸，其催化能力将提高2倍。通过蛋白质工程生产高效凝乳酶，所需步骤有 b、a、d、eb、a、d、e。
a.蛋白质的结构设计
b.蛋白质的结构和功能分析
c.蛋白质结构的定向改造
d.凝乳酶基因的定向改造
e.将改造后的凝乳酶基因导入受体细胞
f.将定向改造的凝乳酶导入受体细胞
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】mRNA；限制酶；BamHⅠ和 PstⅠ；在不破坏目的基因的基础上，双酶切割可使质粒和目的基因形成相同的黏性末端，防止错连；甲和丙；甲中目的基因插入在启动子的上游，丙中目的基因插入在终止子的下游（甲、丙中目的基因不在启动子和终止子之间），两者目的基因均不能转录；含有内质网和高尔基体，可对蛋白质进行加工和修饰；b、a、d、e
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：15引用：2难度：0.7
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3．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6
