大丽轮枝菌（一种丝状真菌）是引起棉花黄萎病的主要病原菌。为观察大丽轮枝菌对棉花根侵染路径，研究人员利用绿色荧光蛋白基因（sGFP）转染大丽轮枝菌，培育出表达绿色荧光蛋白的转基因菌株，主要过程如图（图中a链和b链分别是相应基因转录模板链）。分析回答：
（1）研究者将获得的sGFP基因利用PCR技术扩增，该过程需设计合适的引物。设计引物时需已知sGFP基因两端的核苷酸序列sGFP基因两端的核苷酸序列，为便于进行后续操作还需在引物中添加限制酶的识别序列，图中b链的黏性末端碱基序列（5'→3'）为AGCTAGCT。PCR扩增时需要设计2种引物，其原因是基因由两条反向平行的链构成，且都作模板，其上碱基序列不同基因由两条反向平行的链构成，且都作模板，其上碱基序列不同。PCR技术操作步骤中包括两次升温和一次降温，其中降温的目的是使引物和模板链结合使引物和模板链结合。
（2）利用图示目的基因和质粒构建重组质粒，选用限制酶HindⅢ和BamHⅠ切割，优点是产生不同的黏性末端，防止目的基因和载体反向连接，自身环化产生不同的黏性末端，防止目的基因和载体反向连接，自身环化。
（3过程③要初步筛选出导入重组质粒的农杆菌，要在含有潮霉素潮霉素的培养基中进行培养。
（4）用sGFP基因作为探针可检测转基因大丽轮枝菌中是否含有sGFP基因，sGFP基因的mRNAsGFP基因，sGFP基因的mRNA，最终通过检测大丽轮枝菌菌丝细胞中绿色荧光强度大丽轮枝菌菌丝细胞中绿色荧光强度筛选出绿色荧光蛋白旺盛表达的大丽轮枝菌。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】sGFP基因两端的核苷酸序列；AGCT；基因由两条反向平行的链构成，且都作模板，其上碱基序列不同；使引物和模板链结合；产生不同的黏性末端，防止目的基因和载体反向连接，自身环化；潮霉素；sGFP基因，sGFP基因的mRNA；大丽轮枝菌菌丝细胞中绿色荧光强度
【解答】
【点评】
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发布：2024/4/20 14:35:0组卷：24引用：2难度：0.5
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3．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6
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