新冠病毒是一种单链RNA病毒,常用“荧光RT-PCR技术”进行检测,方法是取检测者的mRNA逆转录出cDNA,并大量扩增,时,用荧光标记的新冠病毒核酸探针来检测PCR产物中是否含有新冠病毒的cDNA.请回答下列问题:
(1)“荧光RT-PCR技术”所用的试剂盒中通常都应该含有:逆转录酶逆转录酶、热稳定性DNA聚合酶(Taq酶)热稳定性DNA聚合酶(Taq酶)、荧光标记的核酸探针、引物、dNTP、缓冲体系。
(2)如果要同时扩增两种基因,则试剂盒中的引物应该有44种。如图1为新冠病毒的“ORFlab基因”对应的cDNA片段结构示意图,则与之对应的引物结合的部位应该是图中的4、14、1(子链延伸方向为其自身的5′→3′,用图中数字作答)。若已知该基因的引物Ⅰ,能否依据其碱基序列设计出另一种引物Ⅱ?不能不能,理由是两段引物的碱基序列没有相关性(既不相同,也不互补)两段引物的碱基序列没有相关性(既不相同,也不互补)。

(3)在检测过程中,随着PCR的进行,反应产物不断累积,“杂交双链”荧光信号的强度也等比例增加。可通过荧光强度的变化监测产物量的变化从而得到一条荧光扩增曲线图(如图2)。

①“平台期”出现的最可能的原因是试剂盒中的原料、引物和探针数量一定,超出一定的循环数后,荧光标记的“杂交双链”不再增加试剂盒中的原料、引物和探针数量一定,超出一定的循环数后,荧光标记的“杂交双链”不再增加。
②理论上,在检测过程中,有荧光标记的“杂交双链”出现,则说明检测结果呈阳阳(填“阴”或“阳”)性,但为了保证检测结果的准确性,一般要达到或超过阈值时才确诊。现有两个待检样本,检测时都出现了上述形态的曲线,但甲的a点比乙的a点明显左移。请给这种结果做出科学合理的解释(试剂盒合格且正常,操作过程规范且准确):甲样本中的新冠病毒含量更高达到阈值所需的循环数更少甲样本中的新冠病毒含量更高达到阈值所需的循环数更少。
【考点】DNA片段的扩增与电泳鉴定.
【答案】逆转录酶;热稳定性DNA聚合酶(Taq酶);4;4、1;不能;两段引物的碱基序列没有相关性(既不相同,也不互补);试剂盒中的原料、引物和探针数量一定,超出一定的循环数后,荧光标记的“杂交双链”不再增加;阳;甲样本中的新冠病毒含量更高达到阈值所需的循环数更少
【解答】
【点评】
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