引起人类产生埃博拉出血热的埃博拉病毒（EBOV），是一种单链RNA病毒，某研究团队利用其跨膜表面糖蛋白（GP），以重组腺病毒为载体研发了埃博拉疫苗。腺病毒是一种DNA病毒，腺病毒载体包括骨架质粒（携带腺病毒的主要功能基因）和穿梭质粒（能转移外源基因到骨架质粒上）。如图为重组埃博拉疫苗制作的部分流程示意图，已知四种限制性核酸内切酶KpnⅠ、BamHⅠ、NheⅠ、BgⅢ的识别序列和酶切位点分别为：GGTAC^↓C、G^↓GATCC、G^↓CTAGC、A^↓GATCT．请回答下列问题：

（1）为了判断是否感染EBOV，利用探针对疑似患者进行核酸检测，其检测方法采用了

分子杂交

分子杂交

技术。为了提高检测的准确性，需从EBOV核酸中选取具有

特异性

特异性

的序列作为探针设计的模板。
（2）从EBOV基因组中分离出的GP基因不能直接与穿梭质粒重组，其原因是

GP基因是单链RNA结构

GP基因是单链RNA结构

；而过程①获得的GP基因片段因两端缺乏

相应的限制酶酶切位点

相应的限制酶酶切位点

也不能直接与穿梭质粒重组。研究人员在过程①获得的GP基因片段下游添加了含“-AGATCT-”的序列，则需在其上游添加包含有

-GGTACC-

-GGTACC-

序列的片段，以便与穿梭质粒重组，且能避免GP基因反向连接。
（3）实际操作中需利用限制酶将环状的重组穿梭质粒切成两个核苷酸片段，则切割前后含有的游离磷酸基团数目变化为

0→4

0→4

。将含GP基因的核苷酸片段与骨架质粒通过过程④完成重组，再在含

卡那霉素

卡那霉素

的平板上培养，筛选出含重组骨架质粒的阳性菌。
（4）过程⑤中，利用脂质体将重组骨架质粒导入到人的胚胎肾细胞HEK293中，其运用的原理是

膜的流动性

膜的流动性

，再将成功导入的细胞HK293培养一段时间，获得大量重组腺病毒，为疫苗的进一步研究奠定基础。