基因定点整合可替换特定基因，该技术可用于单基因遗传病的治疗。苯丙酮尿症是由某基因（A）突变引起的，将正常A基因定点整合到A基因突变的小鼠胚胎干细胞的染色体DNA上，替换突变基因，可用来研究该病的基因治疗过程。基因定点整合的过程如图所示，已知neor基因可作为标记基因，含有neor的细胞具有对G418的抗性。回答下列问题：
（1）构建重组载体，常用的工具酶有 限制酶和DNA连接酶限制酶和DNA连接酶。构建重组载体时，需要大量A基因，常用 PCRPCR技术合成A基因，利用该方法合成A基因时需要设计并合成 两两种引物。
（2）将重组载体导入患病小鼠胚胎干细胞的常用方法为 显微注射法显微注射法。检测患病小鼠胚胎干细胞中是否导入重组载体的方法是在含有 G418G418的培养液中培养胚胎干细胞。
（3）用图中重组载体转化胚胎干细胞时，会出现A基因错误整合。错误整合时，重组载体上的两个HSV-tk至少会有一个neor一起整合到染色体DNA上。已知HSV-tk1、HSV-tk2的产物都把DHPG转化成有毒物质而使细胞死亡。将导入重组载体胚胎干细胞置于同时含有G418和DHPG的培养，存活下来的是 正确整合正确整合（填“正确整合”或“错误整合”）的胚胎干细胞，理由是 能在含有G418的培养液中存活说明转化后的胚胎干细胞中含neor，能在含DHPG的培养液中存活说明转化后的胚胎干细胞中不含有HSV-tk能在含有G418的培养液中存活说明转化后的胚胎干细胞中含neor，能在含DHPG的培养液中存活说明转化后的胚胎干细胞中不含有HSV-tk。
（4）将上述筛选得到的胚胎干细胞培育成转基因小鼠，还需要 早期胚胎培养、胚胎移植早期胚胎培养、胚胎移植（答出两点）技术。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】限制酶和DNA连接酶；PCR；两；显微注射法；G418；正确整合；能在含有G418的培养液中存活说明转化后的胚胎干细胞中含neor，能在含DHPG的培养液中存活说明转化后的胚胎干细胞中不含有HSV-tk；早期胚胎培养、胚胎移植
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：4引用：1难度：0.7
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1．下列有关基因工程技术和蛋白质工程技术叙述正确的是（ ）
发布：2025/1/5 8:0:1组卷：6引用：1难度：0.7 -
2．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6 -
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发布：2024/12/31 5:0:5组卷：3引用：2难度：0.7
