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厌氧微生物在自然界中分布广泛,种类繁多,作用也日益引起重视。由于它们不能代谢氧来进一步生长,且多数情况下氧气分子的存在对其有害,所以在进行分离、培养时必须处于去除氧的环境下。分离和培养厌氧菌的方法很多,碱性焦性没食子酸法是操作比较简单的方法之一。焦性没食子酸与碱溶液NaOH作用后形成易被氧化的碱性没食子盐,它能通过氧化作用除掉密封容器中的氧气。
菌种:巴氏芽孢梭菌(一种厌氧菌)、荧光假单胞菌。
培养基:牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、葡萄糖牛肉膏蛋白胨琼脂培养基。
溶液或试剂:焦性没食子酸、10%NaOH溶液,灭菌的石蜡凡士林等。
仪器或其他用具:灭菌脱脂棉、灭菌的培养皿和培养皿盖等。
请完成下列实验步骤及相关问题:
(1)用灭菌完成的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基进行
倒平板
倒平板
(填操作步骤),待培养基凝固稍干燥后,在平板上最好采用
平板划线
平板划线
法一半接种巴氏芽孢梭菌,另一半接种荧光假单胞菌,并在皿底用记号笔作好标记。
(2)滴加10%NaOH溶液约2mL于焦性没食子酸上,切勿使溶液溢出脱脂棉,立即将
已接种的平板
已接种的平板
覆盖于培养皿盖上,必须将脱脂棉全部罩住,目的是既可以使碱性没食子盐充分去除氧气,又防止
培养皿和皿盖出现较大缝隙导致氧气和杂菌进入
培养皿和皿盖出现较大缝隙导致氧气和杂菌进入
,除此之外,焦性没食子酸反应物不能与培养基表面接触。最后,以溶化的石蜡凡士林液密封培养皿与皿盖的接触处,置30℃培养,定期观察平板上菌种的生长状况并记录。
(3)在进行厌氧培养时,同时接种荧光假单胞菌,它是一种
好氧
好氧
菌,目的是监测容器内的氧气环境。
(4)各种厌氧微生物对氧的耐受能力有所不同。以下是采用深层琼脂法(培养基不同深度含氧量不同)探究某种厌氧菌的耐氧能力实验:
用无菌生理盐水,制成菌悬液。将装有葡萄糖牛肉膏蛋白胨琼脂培养基的试管置于100℃水浴中溶化并保温5~10min。将试管取出后,室温静置冷却至45~50℃时,无菌操作吸取0.1mL细菌悬液加入试管中,双手快速搓动试管(如图),目的是
使菌种均匀分布于培养基中
使菌种均匀分布于培养基中
,不采用震荡是避免达到目的的同时有过多的空气混入培养基。之后将试管置于冰浴中,使培养基迅速凝固。将上述试管置于28℃温室中静置保温48h后开始连续进行观察,直至结果清晰为止,根据
细菌在试管中的生长部位
细菌在试管中的生长部位
来判断细菌的耐氧能力大小。

【答案】倒平板;平板划线;已接种的平板;培养皿和皿盖出现较大缝隙导致氧气和杂菌进入;好氧;使菌种均匀分布于培养基中;细菌在试管中的生长部位
【解答】
【点评】
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发布:2024/6/27 10:35:59组卷:13引用:1难度:0.7
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  • 1.回答下列关于微生物的问题.
    阿拉伯胶是一种多糖,研究者从某地合欢树下距离地表深10~15cm处的土样中初筛到能合成阿拉伯胶降解酶的菌株SM01,以下为该菌株的鉴定过程.
    (1)为获得单菌落,可采用平板划线法或
     
    法将初筛菌液接种在
     
    培养基上.46SM01菌落为粉白色,初期呈突起絮状,在显微镜下观察到,菌丝白色致密,且有分生孢子,细胞核直径约1μm,初步推测为真菌,则其特征中,最能说明SM01是真菌的是有细胞核,且有分生孢子.SM01还一定具有的结构有(多选)
     

    A.细胞膜    B.核糖体    C.拟核    D.荚膜
    (2)表中培养液pH均为6.0,若对SM01中阿拉伯胶降解酶的活力进行测定,则应选用表中的
     
    培养液,针对不选用的其他培养液,分别说明原因:
    ①缺少
     
    ,SM01不能很好生长
    ②具有
     
    ,会影响对SM01自身产生的酶活力的测定结果
    ③缺乏
     
    ,会影响SM01的生长,也无法对阿拉伯胶酶活力进行测定.
    表 试验用培养液配方
     培养液 阿拉伯胶  阿拉伯胶酶   NaNO3  牛肉膏  K2SOPO4  MgSO4•7H2O KCl FeSO4•7H2O
     
     A
     25g/L
     __  __  __
     g/L

     g/L

     g/L
     g/L
     B
     25g/L

     g/L
     __
     g/L

     g/L

     g/L

     g/L

     g/L
     C  __  __
     g/L
     __
     g/L

     g/L

     g/L

     g/L
     D
     25g/L
     __
     g/L
     __
     g/L

     g/L

     g/L

     g/L

    发布:2025/1/2 8:0:1组卷:6引用:1难度:0.5
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    (1)采样与细菌的筛选:在某热电厂烟囱周围区域要尽量做到
     
    采集土样.为确保能够从样品中分离到所需要的烟气脱硫细菌,可以通过
     
    增加脱硫菌的浓度.
    (2)驯化脱硫细菌:将筛选出的脱硫细菌接种于有少量无菌水的三角瓶中,边搅拌边持续通入SO2气体几分钟,然后接种到培养基上,待长出菌落后再重复上述步骤,并逐步延长通SO2的时间,同时逐步降低培养基的pH.此操作的目的是分离出
     
    的脱硫细菌.
    (3)培养与观察:一般来说,在一定的培养条件下(相同的培养基、温度及培养时间),驯化后的脱硫细菌表现出稳定的
     
    特征.用高倍显微镜
     
    (填“可以”或“不可以”)观察到脱硫细菌的核糖体.
    (4)探究生长规律:在计数时,计数方法有稀释涂布平板法和
     
    直接计数法.在用稀释涂布平板法进行计数时,当样品的稀释度足够高时,培养基表面生长的一个菌落来源于样品稀释液中的
     
    ;通过统计平板上的菌落数,就能推测出样品中大约含有多少活菌,通常推测统计的菌落数往往比活菌的实际数目
     

    发布:2025/1/1 8:0:2组卷:6引用:2难度:0.5
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